[發(fā)明專利]一種有機(jī)液態(tài)奶的鑒別方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710003501.9
• 申請(qǐng)日: 2017-01-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106841428A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐曉云;李亞男;李慧;潘思軼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 武漢開(kāi)元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司42104
• 代理人: 徐紹新

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及有機(jī)液態(tài)奶的鑒別方法。

背景技術(shù)

2015年世界牛奶年產(chǎn)量預(yù)計(jì)可超8億噸，是市面上消耗量最大的食物之一。作為飲食中蛋白質(zhì)、脂肪等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要來(lái)源，同時(shí)提供包括生物活性肽、抗氧化劑、維生素、礦物質(zhì)等多種生理活性物質(zhì)，被譽(yù)為膳食中完美的食物之一。

我國(guó)有機(jī)產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，特別是在果蔬、奶制品等方面。2014年的有機(jī)食品銷售額已達(dá)到37.01億歐元，同比增長(zhǎng)52.3％。然而，較低的產(chǎn)量和較高的認(rèn)證成本導(dǎo)致有機(jī)產(chǎn)品價(jià)格往往比其傳統(tǒng)生產(chǎn)的同行高，并且由于缺乏相應(yīng)的鑒別分析技術(shù)，有機(jī)食品真實(shí)性難以追溯。

針對(duì)脂肪酸、抗氧化劑、激素及農(nóng)獸藥殘留等一種或幾種指標(biāo)的定性、定量的分析，可以對(duì)有機(jī)牛奶和普通牛奶進(jìn)行有效的區(qū)分，但是存在一定的局限性，并不能全面反映有機(jī)牛奶的品質(zhì)，且因?qū)嶒?yàn)室和操作人員的不同會(huì)對(duì)方法的準(zhǔn)確度和精密度造成影響。因此以有機(jī)液態(tài)奶作為研究對(duì)象，對(duì)其有機(jī)真實(shí)性進(jìn)行鑒別研究是一個(gè)具有價(jià)值的研究方向。

現(xiàn)有的研究表明，非靶向代謝指紋圖譜可用于區(qū)分有機(jī)/非有機(jī)系統(tǒng)生成產(chǎn)品，如馬鈴薯、包菜、胡蘿卜、小麥、辣椒、番茄、番茄汁、菠菜、大蒜、辣椒、番茄醬、玉米粒、紅葡萄、萵苣、蘋果、花椰菜等。然而未見(jiàn)將非靶向代謝指紋圖譜應(yīng)用于有機(jī)/非有機(jī)系統(tǒng)液態(tài)奶的鑒別中。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種基于非靶向檢測(cè)的有機(jī)液態(tài)奶鑒別方法，該方法為有機(jī)液態(tài)奶的鑒別提供了新途徑。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，

一種有機(jī)液態(tài)奶的鑒別方法，它包括以下步驟：

1)樣品提取：將待測(cè)樣品用醇溶液進(jìn)行震蕩提取，提取液氮?dú)獯蹈珊笥眉姿崴芤簭?fù)溶，然后經(jīng)0.22um濾膜過(guò)濾；

2)UPLC-MS檢測(cè)：將濾液經(jīng)色譜分離并采用質(zhì)譜檢測(cè)分析，得到樣本的原始代謝圖譜，其中，色譜分離采用的是HSS T3色譜柱，流動(dòng)相是甲酸水溶液與乙腈，采用梯度洗脫；

3)對(duì)原始代謝圖譜進(jìn)行分析，從而鑒別有機(jī)液態(tài)奶。

優(yōu)選地，所述待測(cè)樣品在提取前還有進(jìn)行脫脂處理的步驟。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述脫脂處理的方法是先將待測(cè)樣品進(jìn)行超聲破乳，然后離心脫脂。

優(yōu)選地，所述醇溶液為甲醇。

優(yōu)選地，所述甲酸水溶液的質(zhì)量濃度為0.1％。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述梯度洗脫的程序、流速及流動(dòng)相中各成分的體積百分比為：

優(yōu)選地，所述質(zhì)譜檢測(cè)的條件是：電噴霧離子化，采用ESI+模式檢測(cè)，毛細(xì)管電壓1.0KV，錐孔電壓30.0V，錐孔氣流速50L/h，源溫度150℃，霧化氣溫度550℃，霧化氣流速1000L/h，以MSE為采集模式，低碰撞能量4eV，高碰撞能量10-50eV，采集質(zhì)量范圍50-1200m/z，應(yīng)用亮氨酸-腦啡肽作為鎖定質(zhì)量，正離子模式下產(chǎn)生[M+H]⁺離子556.2771Da。

優(yōu)選地，步驟3)中，將樣本的原始代謝圖譜采用Progenesis QI軟件導(dǎo)入，進(jìn)行峰對(duì)齊，峰提取，去卷積預(yù)處理，再對(duì)導(dǎo)出的數(shù)據(jù)依次進(jìn)行PCA、PLS-DA、OPLS-DA模式識(shí)別方法分析，建立多維統(tǒng)計(jì)模型，可視化地顯示有機(jī)液態(tài)奶與普通牛奶的代謝譜差異，并采用模型的VIP值，結(jié)合學(xué)生氏t檢驗(yàn)的p值篩選獲得差異代謝物，并對(duì)這些物質(zhì)進(jìn)行初步鑒定。

本發(fā)明能全面反映有機(jī)牛奶的品質(zhì)，全面、綜合地區(qū)分有機(jī)液態(tài)奶中代謝產(chǎn)物的差異，準(zhǔn)確地將有機(jī)液態(tài)奶與普通牛奶鑒別開(kāi)，該方法具有準(zhǔn)確度、重現(xiàn)性好，精密度高，檢測(cè)周期短等優(yōu)點(diǎn)。

附圖說(shuō)明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例1樣本的基峰色譜圖(BPI圖)。

圖2是本發(fā)明實(shí)施例2樣本的基峰色譜圖(BPI圖)。

圖3是本發(fā)明實(shí)施例3樣本的基峰色譜圖(BPI圖)。

圖4是本發(fā)明實(shí)施例4樣本的基峰色譜圖(BPI圖)。

圖5是本發(fā)明實(shí)施例4所有組樣本的主成分分析PCA得分圖。

圖6是本發(fā)明實(shí)施例4采用PLS-DA對(duì)所有樣本的分析得分圖。

圖7是本發(fā)明實(shí)施例4采用OPLS-DA對(duì)兩組樣本的分析得分圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地說(shuō)明。

實(shí)施例1

1.1樣本基本信息

有機(jī)液態(tài)奶和普通液態(tài)奶均為某地大型超市零售，超高溫瞬時(shí)滅菌利樂(lè)磚包裝，產(chǎn)地為內(nèi)蒙古呼和浩特，季節(jié)均取樣于2016年夏季，每個(gè)批次取6個(gè)平行樣本，共計(jì)120個(gè)樣本。