[發明專利]一種酶法制備瑞鮑迪甙N的方法

有效

• 申請號: 201680089986.1
• 申請日: 2016-10-21
• 公開（公告）號: CN109890973B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 陶軍華;李國慶;王文霞;鄭雷雷;朱春磊;梁曉亮;陳車翹
• 申請（專利權）人: 百事可樂公司
• 主分類號: C12P19/56
• 分類號: C12P19/56
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 張小勇

提供一種酶法制備瑞鮑迪甙N的方法，該方法以瑞鮑迪甙A或瑞鮑迪甙J為底物，使所述底物在糖基供體存在下，在UDP?糖基轉移酶和/或含有UDP?糖基轉移酶的重組細胞的催化下反應生成瑞鮑迪甙N。

技術領域

本發明涉及一種瑞鮑迪甙N的制備方法，特別涉及一種瑞鮑迪甙N的生物制備方法。

背景技術

甜味劑是一類廣泛應用于飲料及糖果等食品生產的食品添加劑，其既可以在食品的生產過程中添加，也可以在家庭烘焙時經過適當稀釋作為蔗糖的替代品使用。甜味劑包括天然甜味劑和人工甜味劑，前者包括蔗糖、高果糖玉米糖漿、蜜糖等，后者包括阿斯巴甜、糖精等。甜菊糖是一類從植物甜菊中提取出來的天然甜味劑，目前已被廣泛用在食品及飲料中。甜菊的提取物中具有包含瑞鮑迪甙在內的多種甜菊糖，天然提取的甜菊糖不同的批次成分差異較大，需要后續的提純。

瑞鮑迪甙N在甜菊葉中甜菊糖的比例不超過1.5％，用傳統提取的方法得到高純度的瑞鮑迪甙N極其困難，限制了對瑞鮑迪甙N的深入研究，也阻礙了其商業化的應用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種酶法制備瑞鮑迪甙N的方法，該方法可以較低的成本、較短的周期生產出高純度的瑞鮑迪甙N產品。

為解決以上技術問題，本發明采取如下技術方案：

一種酶法制備瑞鮑迪甙N的方法，以瑞鮑迪甙A為底物，在糖基供體存在下，在含有UDP-糖基轉移酶的重組細胞和/或其制備的UDP-糖基轉移酶的催化下，反應生成瑞鮑迪甙N。

一種酶法制備瑞鮑迪甙N的方法，以瑞鮑迪甙J為底物，在糖基供體存在下，在含有UDP-糖基轉移酶的重組細胞和/或其制備的UDP-糖基轉移酶的催化下，反應生成瑞鮑迪甙N。

優選地，所述糖基供體包括葡萄糖基供體、鼠李糖基供體中一種或二種，所述葡萄糖基供體為UDP-葡萄糖或由蔗糖、蔗糖合成酶及UDP組成的UDP-葡萄糖再生體系(2007，FEBS?Letters，581，2562-2566)，所述鼠李糖基供體為UDP-鼠李糖。其中，優選由蔗糖、蔗糖合成酶和UDP組成的UDP-葡萄糖再生體系，UDP葡萄糖價格較高，采用由UDP-葡萄糖再生體系可以大幅度降低成本。

優選地，所述UDP-糖基轉移酶(即尿苷二磷酸葡萄糖基轉移酶，簡稱UGT，是已知的)包括來自甜菊(Stevia?rebaudiana)的UGT-A、來自水稻(Oryza?sativa)的UGT-B中的一種或二種。

優選地，所述UDP-糖基轉移酶包括來自甜菊的UGT-A和來自水稻的UGT-B；所述UDP-糖基轉移酶分兩步加入到反應體系中，第一步先加入UGT-B，第二步再加入UGT-A。所述UGT-A的氨基酸序列與序列表中所示的序列2具有至少60％的一致性；和/或，所述UGT-B的氨基酸序列與序列表中所示的序列4具有至少60％的一致性。

更優選地，所述UGT-A的氨基酸序列與序列表中所示的序列2具有至少70％的一致性；和/或，所述UGT-B的氨基酸序列與序列表中所示的序列4具有至少70％的一致性。

進一步地，所述UGT-A的氨基酸序列與序列表中所示的序列2具有至少80％的一致性；和/或，所述UGT-B的氨基酸序列與序列表中所示的序列4具有至少80％的一致性。

更進一步地，所述UGT-A的氨基酸序列與序列表中所示的序列2具有至少90％的一致性；和/或，所述UGT-B的氨基酸序列與序列表中所示的序列4具有至少90％的一致性。

在某些具體實例中，所述UGT-A的氨基酸序列與序列表中所示的序列2完全一致；和/或，所述UGT-B的氨基酸序列與序列表中所示的序列4完全一致。

優選地，所述UDP-糖基轉移酶為來自甜菊的UGT-A，所述UGT-A的氨基酸序列與序列表中所示的序列2具有至少60％的一致性。