[發(fā)明專(zhuān)利]一種酶法制備瑞鮑迪甙N的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201680089986.1
• 申請(qǐng)日: 2016-10-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109890973B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陶軍華;李國(guó)慶;王文霞;鄭雷雷;朱春磊;梁曉亮;陳車(chē)翹
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 百事可樂(lè)公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12P19/56
• 分類(lèi)號(hào): C12P19/56
• 代理公司: 中國(guó)貿(mào)促會(huì)專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 11038
• 代理人: 張小勇

1.一種酶法制備瑞鮑迪甙N的方法，包括：

a)在i)包含UDP-糖基轉(zhuǎn)移酶的重組細(xì)胞或ii)由重組細(xì)胞制備的UDP-糖基轉(zhuǎn)移酶的存在下，使瑞鮑迪甙A與糖基供體和鼠李糖基供體在反應(yīng)體系中反應(yīng)，其中i)或ii)中的UDP-糖基轉(zhuǎn)移酶包含SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列，并且其中所述反應(yīng)體系還含有包含SEQ?IDNO:4的氨基酸序列的UDP-糖基轉(zhuǎn)移酶，或

b)在i)包含UDP-糖基轉(zhuǎn)移酶的重組細(xì)胞或ii)由重組細(xì)胞制備的UDP-糖基轉(zhuǎn)移酶的存在下，使瑞鮑迪甙J與糖基供體在反應(yīng)體系中反應(yīng)，其中i)或ii)中的UDP-糖基轉(zhuǎn)移酶包含SEQ?IDNO:2的氨基酸序列，并且

其中a)和b)中的糖基供體是UDP-葡萄糖或UDP-葡萄糖再生體系。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述UDP-葡萄糖再生體系包含蔗糖、蔗糖合成酶及UDP，并且其中所述鼠李糖基供體為UDP-鼠李糖。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述UDP-糖基轉(zhuǎn)移酶包括來(lái)自甜菊的UGT-A、來(lái)自水稻的UGT-B中的一種或二種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述UDP-糖基轉(zhuǎn)移酶包括來(lái)自甜菊的UGT-A和來(lái)自水稻的UGT-B，其中第一步先加入U(xiǎn)GT-B，第二步再加入U(xiǎn)GT-A。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述反應(yīng)體系含有35-45℃溫度以及pH7.5-8.5的水相體系。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述水相體系為磷酸緩沖溶液。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述反應(yīng)體系還含有細(xì)胞通透劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述細(xì)胞通透劑為甲苯，并且其中所述甲苯的體積比濃度為1-3％。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述重組細(xì)胞為微生物細(xì)胞。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述微生物細(xì)胞來(lái)自大腸埃希氏桿菌、釀酒酵母或畢赤酵母。

11.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其還包括通過(guò)樹(shù)脂分離純化所述瑞鮑迪甙N。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中通過(guò)樹(shù)脂分離純化的所述瑞鮑迪甙N的純度大于95％。