[發明專利]具有轉谷氨酰胺酶識別位點的FKBP結構域

有效

• 申請號: 201680081877.5
• 申請日: 2016-12-13
• 公開（公告）號: CN108699104B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: M.施雷姆爾;W.斯蒂芬
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: C07K1/13
• 分類號: C07K1/13;C12N9/90;G01N33/532;G01N33/58;G01N33/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 梁謀;黃希貴

1.根據下述通式I的重組轉谷氨酰胺酶(TG)底物

(F*-L)_y-X (I)

其中，

F*選自FKBP多肽的FKBP結構域的氨基酸序列，其中所述FKBP結構域包含根據SEQ IDNO: 54的SLYD多肽的N末端氨基酸1至64和123至149，其中氨基酸65至122被替換為5至20個氨基酸的氨基酸序列(“Q標簽”)，其中所述Q標簽選自SEQ ID NO: 8、11、18和20中的任一者；

L不存在或選自包含小氨基酸的接頭氨基酸序列，其中所述小氨基酸選自甘氨酸或丙氨酸；和

X是目標蛋白質，其中所述目標蛋白質選自酶、抗原、抗體或其片段，以及其他免疫結合配偶體；

y是1至100的整數，

并且其中所述TG底物是根據SEQ ID NO: 23的白色庫茨涅爾氏菌TG的TG功能的底物。

2.根據權利要求1的重組轉谷氨酰胺酶(TG)底物，其中所述接頭序列L包含1至20個氨基酸。

3.根據權利要求1或2的重組轉谷氨酰胺酶(TG)底物，其中所述抗原是病毒蛋白質。

4.一種用于標記目標蛋白質的體外方法，其包括：

a) 提供附接至目標蛋白質的根據權利要求1至3中任一項的重組轉谷氨酰胺酶(TG)底物，

b) 提供有效量的白色庫茨涅爾氏菌的轉谷氨酰胺酶，

c) 提供包含烷基胺基團的連接的合適標記，和

d) 使根據a)至c)的所述組分接觸，由此所述轉谷氨酰胺酶將所述標記附接至所述底物。

5.根據權利要求4的方法，其中所述烷基胺基團為賴氨酸。

6.根據權利要求4的方法，其中所述白色庫茨涅爾氏菌的轉谷氨酰胺酶是重組產生的。

7.根據權利要求4的方法，其中所述白色庫茨涅爾氏菌的轉谷氨酰胺酶是根據SEQ IDNO: 23的白色庫茨涅爾氏菌的轉谷氨酰胺酶。

8.根據權利要求4的方法，其中所述標記選自酶、生物素、放射性基團、染料、同位素、化學發光標記和金屬。

9.根據權利要求8的方法，其中所述染料為熒光染料。

10.根據權利要求4的方法，其中所述標記以標記和目標蛋白質的化學計量比實現。

11.根據權利要求10的方法，其中所述化學計量比為1:1。

12.根據權利要求4-11中任一項的方法，其中所述目標蛋白質選自酶、抗原、抗體或其片段、以及其他免疫結合配偶體。

13.根據權利要求12的方法，其中所述抗原是病毒蛋白質。

14.一種藥物或診斷組合物，其包含如根據權利要求4-13中任一項的方法產生的至少一種標記的目標蛋白質，連同藥學上可接受的載體化合物。

15.根據權利要求14的藥物或診斷組合物，其中所述目標蛋白質以標記和目標蛋白質的化學計量比標記。

16.根據權利要求15的藥物或診斷組合物，其中所述化學計量比為1:1。

17.一種診斷試劑盒，其包含根據權利要求14-16中任一項的診斷組合物。

18.根據權利要求17的診斷試劑盒，其還包含用于執行免疫測定的其他組分。