[發明專利]重組絲氨酸蛋白酶

在審

• 申請號: 201680078249.1
• 申請日: 2016-11-25
• 公開（公告）號: CN108463553A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 丹尼爾·韋爾赫夫;彼得·H·雷特斯馬;梅蒂納·H·A·博斯
• 申請（專利權）人: 萊頓教學醫院
• 主分類號: C12N9/64
• 分類號: C12N9/64;C12N9/74;C12N9/72
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 沈敬亭;李小爽

本發明涉及包括絲氨酸蛋白酶多肽的重組蛋白，該絲氨酸蛋白酶多肽在絲氨酸蛋白酶抑制劑的存在下具有絲氨酸蛋白酶活性，并且能夠例如在用絲氨酸蛋白酶抑制劑治療的受試者中完全或部分逆轉絲氨酸蛋白酶抑制劑的作用。更具體地，本文描述了用于完全或部分逆轉凝血抑制劑的抗凝血作用的重組蛋白和方法。

技術領域

本發明在用于醫療目的的制劑領域內。更具體地，本發明涉及特定的重組絲氨酸蛋白酶，其在絲氨酸蛋白酶抑制劑的存在下具有絲氨酸蛋白酶活性。

背景技術

目前正在開發不斷增加數量的絲氨酸蛋白酶抑制劑，其防止或抑制絲氨酸蛋白酶進行其蛋白酶活性。絲氨酸蛋白酶(或絲氨酸肽鏈內切酶)是切割蛋白中的肽鍵的酶，其中絲氨酸在蛋白酶活性位點處充當親核性氨基酸(Hedstrom，2002.Chem Rev 102：4501-4524)。在人體中，絲氨酸蛋白酶負責協調各種生理過程，包括消化、免疫應答、凝血和生殖(Hedstrom，2002.Chem Rev 102：4501-4524)。一些眾所周知的絲氨酸蛋白酶包括凝血酶、凝血因子XIa、尿激酶類纖溶酶原激活物和胰蛋白酶，前兩種參與凝血。

絲氨酸蛋白酶可被不同種類的抑制劑抑制，包括合成化學抑制劑和天然蛋白抑制劑。稱作“serpins”(絲氨酸蛋白酶抑制劑(serine protease inhibitor)的縮寫)的一族天然抑制劑可與絲氨酸蛋白酶形成共價鍵，從而抑制其功能。研究最多的絲氨酸蛋白酶抑制劑中的一些是抗凝血酶和α1-抗胰蛋白酶，由于其分別在凝血和肺氣腫中的作用而為人所知。

正在開發諸如直接凝血酶抑制劑(DTI)的直接絲氨酸蛋白酶抑制劑，并且由于其療效迅速、易于給藥并且不需要監控，因此預期其在不久的將來會大規模替換諸如抗凝血酶的經典口服抗凝血劑(He等人，2015.Molecules 20，11046-11062；Wang等人，2015.ArchPharm 348：595-605)。這些抑制劑靶向絲氨酸蛋白酶的活性位點，并且通常是適合口服給藥的小分子。單價DTI除了別的以外還包括阿加曲班、美拉加群或其前藥、希美加群或其前藥、達比加群或其前藥、達比加群酯(Dabigatran Etexilate)或其類似物、肽或擬肽(peptidomimetic)抑制劑(Mehta等人，2014.Expert Opin Ther Pat 24：47-67)、RWJ-671818或其類似物(Lu等人，2010.J Med Chem 53：1843-1856)、3-(2-苯乙基氨基)-6-甲基-1-(2-氨基-6-甲基-5-亞甲基酰胺基甲基吡啶基)吡嗪酮或其類似物、(Sanderson等人，1998.J Med Chem 41：4466-4474)、(E)-N-(3-((1-(苯并[b]噻吩-2-基甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)苯基)-2-(3-氯苯基)乙烯磺酰胺或其類似物(Siles等人，2011.BioorgMed Chem Lett 21：5305-5309)、N-{3-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-1-吡啶-4-基哌啶-4-甲酰胺或其類似物(de Candia等人，2013.J Med Chem 56：8696-8711)、以及Merck的化合物2或其類似物(Morrissette等人，2004.Bioorg Med Chem Lett 14：4161-4164)。單價DTI已經被專門設計為與凝血酶的活性位點緊密結合并停止其蛋白酶活性。