[發明專利]一種脫細胞豬角膜的制備方法及其脫細胞板層角膜和用法

有效

• 申請號: 201680077703.1
• 申請日: 2016-12-16
• 公開（公告）號: CN109475663B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 李志寒;李潔;詹曉亮;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 廈門大開生物科技有限公司
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種豬脫細胞板層角膜的制備方法及其豬脫細胞板層角膜，制備方法為：預處理(S1)：對新鮮豬角膜的預處理,制作板層角膜；干燥處理(S2)：將預處理后板層角膜進行干燥處理；采用酶處理方法進行脫細胞(S3)：將干燥后角膜加入酶溶液；置于震蕩培養箱中震蕩處理；再將角膜置于震蕩培養箱震蕩洗滌處理，獲得脫細胞角膜。滅菌處理：(S4)。

所屬領域

本發明涉及一種脫細胞豬角膜的制備方法，及可以直接用于人角膜移植術的以豬角膜為材料的板層脫細胞角膜及其使用方法。

背景技術

角膜盲是我國的第二大致盲性眼病，角膜移植是角膜盲患者復明唯一有效的治療手段。但角膜供體材料的匱乏嚴重影響角膜移植，經過中國科學家十余年努力研發出的以豬角膜為原材料的人工角膜可以代替代人源角膜，并在全世界范圍內率先取得臨床試驗的成功。

現有的研究成果證明，以豬角膜為來源材料制備的人工角膜具有很好的生物相容性。特別是豬角膜具有與人角膜高度近似的組織結構、生物物理學特性和光學特性是角膜替代物的最佳選擇的公認結論。而國內的研究成果所取得進展顯示，豬角膜已經被作為人角膜移植備用材料一個重要的替代來源之一。目前部分脫細胞的豬角膜產品已經進行臨床階段，并產生一定的臨床效果。為解決國內移植用角膜供體嚴重缺乏的現狀提供了極好的解決方案，為國內數百萬因角膜致盲的患者帶來復明的希望。

角膜位于眼球的前部，是一種結構高度規則、相對無細胞的透明膠原組織。現有的板層脫細胞角膜基質僅包含有前彈力層和基質層。經過必要的脫細胞處理去除基質層內的免疫原性(DNA)，降低豬角膜移植的免疫排斥反應。再通過病毒滅活，滅菌處理降低角膜移植中的動物源性病毒、細菌感染，從而達到板層角膜可以用于移植的必要的生物學指標。

角膜基質層的結構特點在于其基質層內的膠原纖維有序且相互平行的排列，這種排列方式構成了角膜彈性機械強度及其透明度的等物理學特性結構基礎。角膜的這個重要特征可以在植入后，誘導受體角膜基質細胞有序、均勻地長入，使角膜保持透明。

基于對上述板層角膜基質特點的分析，角膜基質層排列結構的高度保持，是實現板層角膜必要的生物物理學特性的重要因素。然而，目前的脫細胞方法都會在不同程度上對基質層的有序排列造成損害。其結果是在達到移植條件的必要的生物學指標的同時，都不可避免地破壞了角膜彈性機械強度及其透明度的等物理學特性。特別是角膜的透明度，從而大大地減損了角膜的復明功效。

酶法是角膜脫細胞處理的各種方法中最有效地方法。現有酶解法中使用酶試劑主要有：脂類酶、核酸酶和蛋白酶等；不同的酶類針對特定的細胞成分。其所存在的缺陷：首先，不能達到完全的脫細胞效果；其二，上述所列出的酶、特別是蛋白酶，對角膜細胞外基質也存在明顯的破壞作用，導致角膜的透明度下降。

另外，現采用酶解脫細胞方法是，在角膜進行預處理后直接浸入酶溶液中。由于在預處理過程中，角膜的含水量不可避免地增大了，再將角膜直接浸入酶溶液后，酶溶液很難進入角膜內，大大地影響了酶對角膜基質內細胞的降解效果。很多情況下為保證脫細胞效果往往采用延長酶解處理時間的辦法，增大了對角膜的透明度的等物理學特性的破壞機率。

角膜的滅菌處理是角膜制備不可或缺的步驟，其作用是完全殺滅角膜內的細菌、病毒等有害微生物。隨著各種新的滅菌技術的成熟及廣泛應用，輻照滅菌技術引入了角膜的滅菌處理。但是通過大量的角膜輻照滅菌試驗結果來看，輻照滅菌后，角膜的透明度、生物力學特性均有比較明顯的下降。美國國際組織庫在進行的人角膜輻照滅菌試驗，以及對比輻照前后角膜的透明度等試驗數據分析后指出，常溫條件下對人來源的角膜供體進行輻照滅菌，伽馬射線可以使細胞外基質發生一些變化，但不會影響角膜透明度。但是，申請人以用動物來源角膜(特別豬角膜)制備的人工角膜的試驗得出的結果是，輻照后角膜的理化性能同樣會發生改變，從而導致輻照后角膜的透明度、韌性、親水力與新鮮角膜相比，發生明顯變化。