[發(fā)明專利]一種脫細(xì)胞豬角膜的制備方法及其脫細(xì)胞板層角膜和用法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201680077703.1
• 申請(qǐng)日: 2016-12-16
• 公開（公告）號(hào): CN109475663B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李志寒;李潔;詹曉亮;其他發(fā)明人請(qǐng)求不公開姓名
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廈門大開生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61L27/38
• 分類號(hào): A61L27/38
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1.一種豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，至少如下步驟：

S1、預(yù)處理：對(duì)新鮮豬角膜的預(yù)處理包括如下處理：

S1.1取新鮮豬角膜，去除上皮層；

S1.2制備板層角膜；所述板層角膜僅包括前彈力層和基質(zhì)層；

S1.3清洗干凈；

S2:干燥處理：將預(yù)處理后板層角膜進(jìn)行干燥處理；

S3:脫細(xì)胞處理：將干燥處理后角膜進(jìn)行脫細(xì)胞處理：

S3.1酶處理：采用DMEM培養(yǎng)基配置全能核酸酶溶液；將干燥后角膜加入上述酶溶液；置于震蕩培養(yǎng)箱中震蕩不小于1小時(shí)；

S3.2清洗：將角膜加入清洗溶液中，置于震蕩培養(yǎng)箱震蕩洗滌處理，獲得脫細(xì)胞角膜；

S4：干燥角膜制備:將脫細(xì)胞處理后對(duì)角膜進(jìn)行干燥處理，制備成含水率含水量為5％-20％的干燥角膜；

S5:滅菌處理：采用鈷60輻照滅菌，輻照劑量不大于25kgy。

2.如權(quán)利要求1所述的豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，在S1.2步驟中取板層角膜厚度為300um～700um。

3.如權(quán)利要求1所述的豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，所述配制的全能核酸酶溶液的濃度為100U～1000U/mg。

4.如權(quán)利要求1所述的豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，角膜的清洗溶液為蒸餾水或氯化鈉溶液或pH6.0至8.0的緩沖溶液。

5.如權(quán)利要求1所述的豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，角膜在酶溶液中的震蕩處理溫度20-30℃。

6.如權(quán)利要求1所述豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，角膜在酶溶液中的震蕩頻率為每分鐘50-80次。

7.如權(quán)利要求1所述豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，角膜在震蕩洗滌過程中的溫度10-20℃。

8.如權(quán)利要求1所述豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，角膜在洗滌過程中的震蕩頻率為每分鐘120～160次。

9.如權(quán)利要求4所述豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，所述清洗用氯化鈉溶液濃度為0.9％。

10.如權(quán)利要求1所述豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，所述鈷60輻照滅菌采用低溫輻照；將角膜置于填充有制冷劑的保溫容器中進(jìn)行輻照滅菌；通過制冷劑使得角膜在輻照全過程中保持在低于0℃的低溫狀態(tài)下。

11.如權(quán)利要求10所述豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，所述的制冷劑是冰或干冰。

12.如權(quán)利要求10或11所述豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，所述角膜低溫輻照滅菌全程中溫度不得高于0℃。

13.如權(quán)利要求11所述的一種豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，所述在進(jìn)行輻照滅菌前，先將角膜進(jìn)行單片密封包裝，將密封包裝后角膜置于低溫制冷劑之中進(jìn)行輻照。

14.如權(quán)利要求12所述的一種豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，所述在進(jìn)行輻照滅菌前，先將角膜進(jìn)行單片密封包裝，將密封包裝后角膜置于低溫制冷劑之中進(jìn)行輻照。

15.如權(quán)利要求1所述的豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，在脫細(xì)胞處理后對(duì)角膜進(jìn)行干燥處理，制備成含水率含水量為5％-20％的干燥角膜。

16.如權(quán)利要求1或15所述的豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法，其特征在于，所述的干燥處理可采用真空干燥。