[發(fā)明專利]一種脫細(xì)胞豬角膜的制備方法及其脫細(xì)胞板層角膜和用法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201680077703.1 | 申請(qǐng)日: | 2016-12-16 |
| 公開(公告)號(hào): | CN109475663B | 公開(公告)日: | 2021-11-26 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 李志寒;李潔;詹曉亮;其他發(fā)明人請(qǐng)求不公開姓名 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 廈門大開生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào): | A61L27/38 | 分類號(hào): | A61L27/38 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 細(xì)胞 角膜 制備 方法 及其 用法 | ||
1.一種豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,至少如下步驟:
S1、預(yù)處理:對(duì)新鮮豬角膜的預(yù)處理包括如下處理:
S1.1取新鮮豬角膜,去除上皮層;
S1.2制備板層角膜;所述板層角膜僅包括前彈力層和基質(zhì)層;
S1.3清洗干凈;
S2:干燥處理:將預(yù)處理后板層角膜進(jìn)行干燥處理;
S3:脫細(xì)胞處理:將干燥處理后角膜進(jìn)行脫細(xì)胞處理:
S3.1酶處理:采用DMEM培養(yǎng)基配置全能核酸酶溶液;將干燥后角膜加入上述酶溶液;置于震蕩培養(yǎng)箱中震蕩不小于1小時(shí);
S3.2清洗:將角膜加入清洗溶液中,置于震蕩培養(yǎng)箱震蕩洗滌處理,獲得脫細(xì)胞角膜;
S4:干燥角膜制備:將脫細(xì)胞處理后對(duì)角膜進(jìn)行干燥處理,制備成含水率含水量為5%-20%的干燥角膜;
S5:滅菌處理:采用鈷60輻照滅菌,輻照劑量不大于25kgy。
2.如權(quán)利要求1所述的豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,在S1.2步驟中取板層角膜厚度為300um~700um。
3.如權(quán)利要求1所述的豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,所述配制的全能核酸酶溶液的濃度為100U~1000U/mg。
4.如權(quán)利要求1所述的豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,角膜的清洗溶液為蒸餾水或氯化鈉溶液或pH6.0至8.0的緩沖溶液。
5.如權(quán)利要求1所述的豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,角膜在酶溶液中的震蕩處理溫度20-30℃。
6.如權(quán)利要求1所述豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,角膜在酶溶液中的震蕩頻率為每分鐘50-80次。
7.如權(quán)利要求1所述豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,角膜在震蕩洗滌過程中的溫度10-20℃。
8.如權(quán)利要求1所述豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,角膜在洗滌過程中的震蕩頻率為每分鐘120~160次。
9.如權(quán)利要求4所述豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,所述清洗用氯化鈉溶液濃度為0.9%。
10.如權(quán)利要求1所述豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,所述鈷60輻照滅菌采用低溫輻照;將角膜置于填充有制冷劑的保溫容器中進(jìn)行輻照滅菌;通過制冷劑使得角膜在輻照全過程中保持在低于0℃的低溫狀態(tài)下。
11.如權(quán)利要求10所述豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,所述的制冷劑是冰或干冰。
12.如權(quán)利要求10或11所述豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,所述角膜低溫輻照滅菌全程中溫度不得高于0℃。
13.如權(quán)利要求11所述的一種豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,所述在進(jìn)行輻照滅菌前,先將角膜進(jìn)行單片密封包裝,將密封包裝后角膜置于低溫制冷劑之中進(jìn)行輻照。
14.如權(quán)利要求12所述的一種豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,所述在進(jìn)行輻照滅菌前,先將角膜進(jìn)行單片密封包裝,將密封包裝后角膜置于低溫制冷劑之中進(jìn)行輻照。
15.如權(quán)利要求1所述的豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,在脫細(xì)胞處理后對(duì)角膜進(jìn)行干燥處理,制備成含水率含水量為5%-20%的干燥角膜。
16.如權(quán)利要求1或15所述的豬脫細(xì)胞板層角膜的制備方法,其特征在于,所述的干燥處理可采用真空干燥。
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A61L27-28 .假體被覆材料
A61L27-36 .含有未確定結(jié)構(gòu)的組分或其反應(yīng)產(chǎn)物
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