[發明專利]通過檢測外周血單個核細胞的γ干擾素分泌來診斷恙蟲病的診斷方法

在審

• 申請號: 201680076852.6
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN108474797A
• 公開（公告）日: 2018-08-31
• 發明（設計）人: 李珍洙
• 申請（專利權）人: 仁荷大學校產學協力團
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N15/14;C12N5/0783;C07K16/24
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 苗堃;金世煜

本發明涉及利用外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear cell；PBMC)的γ?干擾素(interferon?γ；INF?γ)分泌測定的恙蟲病(scrub typhus)診斷方法，本發明的恙蟲病診斷方法通過用恙蟲病東方體提取物對從感染了恙蟲病東方體的患者分離的外周血單個核細胞或者包含外周血單個核細胞的血液進行處理而進行抗原刺激，從而確認了INF?γ生成增加，而在來自非感染者的外周血單個核細胞中幾乎沒有INF?γ生成的變化，因此僅通過上述INF?γ生成濃度的測定也能夠簡單地診斷恙蟲病，進而，本發明的恙蟲病診斷方法與以往的診斷恙蟲病的間接免疫熒光法和用于基因型分析的PCR分析相比，診斷的正確率顯著提高，不僅能夠完全代替以往的診斷方法，而且能夠顯著提高對診斷結果的可信度。

技術領域

本申請主張于2015年12月30日提出申請的大韓民國專利第10-2015-0189371號的優選權，所述專利文件作為本申請的參考文獻。

本發明涉及一種通過檢測外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclearcell；PBMC)的γ干擾素(interferon-γ；INF-γ)分泌來診斷恙蟲病(scrub typhus)的診斷方法，更具體地，包括：從疑似感染了恙蟲病東方體的患者體內分離出外周血單個核細胞或包括外周血單個核細胞的血液，然后，對其處理恙蟲病東方體抽取物，以檢測受到抗原刺激之后所生成的γ干擾素的濃度的步驟。

背景技術

恙蟲病在全球范圍上發病，尤其包括馬來西亞、泰國、菲律賓等國家在內，頻發于中國、日本及澳大利亞，在韓國農村地區被患有稱作為怪疾的絕大多數患者當中，據悉，大多數實為染上了恙蟲病。恙蟲病主要發病于秋季，這主要與作為其傳播媒介的螨幼蟲(chigger)的密度有關，就韓國而言，該病也較多地發生在蒼白纖恙螨(Leptot rombidiumpallidum)的幼蟲較多出現的10-11月份，并發病于全國范圍。

據悉，恙蟲病東方體(O.tsutsugamushi；恙蟲病菌)是寄生于專性細胞內(obligated intracellular)的革蘭氏陰性桿菌。另外，恙蟲病菌是恙蟲病(Scrub typhus)的病原體，其作為急、慢性感染，發病癥狀包括：肺炎(pneumonitis)、腦炎(encephalitis)、出診、發熱及頭疼等。

其癥狀或者流行病癥狀，根據恙蟲病東方體的各個群(血清型)，在不同情況下呈現不同程度的差異。屬于同等群內的菌株之間存在血清學關聯，但是，不同群的菌株之間的血清學交叉反應則較弱或者全無。恙蟲病東方體被分類為是一個種類，但是其具有很多抗原結構不同的血清型，根據抗原的差異，將其分類為吉列姆(Gilliam)、卡普(Karp)、卡托(Kato)等的血清型。在韓國國內則除了吉列姆、卡普以外，還被分類為原株(Kangwon)和保寧株(Boryong)，其血清學反應與熟知的既有的原型菌株不同。

如上所述，用于決定抗原性的多樣性的恙蟲病東方體的細胞膜蛋白抗原中存在種特異性抗原和血清型特異性抗原等。提純恙蟲病東方體，并通過聚丙烯酰胺凝膠電泳和免疫印跡(immunoblotting)對其抗原進行分析得出，存在70、60、54～56、46～47kDa的主要抗原(Takahashi K等,Microbiol.Immunol.29:475,1985)，其中，46～47kDa、54～56kDa及70kDa的蛋白質具有抗原性，而56kDa和46～47kDa蛋白質則為菌株特異抗原(Tamura A等,Microbiol.Immunol.26:321,1982)。一般被認為，恙蟲病的臨床癥狀較輕，且根據其癥狀容易進行臨床診斷，但是，根據報告數據，其存在很多非典型性臨床癥狀，如果并無全身淋巴腺腫脹或者焦痂形成等的恙蟲病特征性所見的話，那么很難與細螺旋體病、皮疹熱及腎綜合征出血熱等的急性熱性疾病進行鑒別。