[發(fā)明專利]提高含F(xiàn)C區(qū)多肽純化效率的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201680069093.0
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN108368166B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設計）人: 田中信幸;百瀨瑠美子
• 申請（專利權）人: 中外制藥株式會社
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K1/22;C12N15/09
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 張瑩

發(fā)現(xiàn)通過制備含F(xiàn)c區(qū)多肽的Fc區(qū)(其中Fc區(qū)的第一多肽鏈與蛋白A樹脂結合但Fc區(qū)的第二多肽鏈不結合樹脂或顯示與其弱結合)，每體積樹脂結合的含F(xiàn)c區(qū)多肽的量增加，并且可以更有效地純化上述含F(xiàn)c區(qū)的多肽。

技術領域

本發(fā)明涉及用于增加蛋白A柱層析中含F(xiàn)c區(qū)多肽對蛋白A樹脂的動態(tài)結合能力的方法，使用此類方法的純化方法等。

背景技術

在抗體藥物的生產中，使用蛋白A柱，離子交換柱等的純化步驟極大地影響抗體的生產效率(產量)；因此，希望增加這些步驟的效率。達到效率的手段包括以下兩種方法：(1)增加每單位體積樹脂的結合能力；和(2)通過高流量處理減少純化所需的時間。

近來，蛋白A樹脂的改進已經發(fā)展，并且更多的抗體可以結合蛋白A樹脂，并且因此實現(xiàn)了有效的抗體純化。例如，作為典型的第一代蛋白A樹脂，對于由GE Healthcare制造的rProtein A sepharose Fast Flow，普通抗體結合能力為15～20g/L樹脂；而對于同一公司生產的第二代Protein A樹脂，Mab Select SuRe，是目前世界上最常用的，通常觀察到的結合能力約為30g/L樹脂。另外，與前一種樹脂相比，后者可以適應大約1.5至2倍高的線性流速，并且抗體分子的更有效的蛋白A純化已成為可能。

雙特異性抗體具有識別兩種不同類型抗原的性質，因此它們攜帶兩種類型的H鏈。因此，含有雙特異性抗體的培養(yǎng)上清液不僅含有2種H鏈的雙特異性抗體，還含有僅含有1種H鏈的抗體。為了從雙特異性抗體中分離這些抗體，已經使用了對蛋白A樹脂具有修飾的結合活性的Fc區(qū)變體(專利文獻1和2)。擔心這種分子修飾可能會具有降低蛋白A純化雙特異性抗體的效率的作用。

在這種情況下，需要使用蛋白A樹脂柱進行更有效的雙特異性抗體純化的新方法。

引文列表

[專利文獻]

[專利文獻1]US20100331527

[專利文獻2]US20130018174

發(fā)明內容

[本發(fā)明要解決的問題]

本發(fā)明的目的是提供使用蛋白A樹脂柱有效純化含F(xiàn)c區(qū)多肽，特別是雙特異性抗體的方法。

[解決問題的手段]

作為解決上述問題的專心研究的結果，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過制備其第一多肽鏈和第二多肽鏈對蛋白A樹脂具有彼此不同的結合活性的Fc區(qū)，抗體的動態(tài)結合能力提高，抗體純化效率提高，從而完成了本發(fā)明。

具體而言，本發(fā)明提供以下內容：

[1]在蛋白A柱層析中增加蛋白A樹脂的含F(xiàn)c區(qū)的多肽的動態(tài)結合能力的方法；

[2]如[1]所述的方法，其包括以下步驟：制備對樹脂具有彼此不同的結合活性的第一多肽鏈和第二多肽鏈，作為Fc區(qū)的第一多肽鏈和第二多肽鏈的步驟；

[3][1]或[2]所述的方法，其包括以下步驟：制備與樹脂結合的第一多肽鏈作為Fc區(qū)的第一多肽鏈，制備第二條多肽鏈，其不與樹脂結合，或者與第一條多肽鏈相比，表現(xiàn)出較弱的與樹脂的結合，作為Fc區(qū)的第二條多肽鏈；

[4]如[1]～[3]中任一項所述的方法，其包括修飾含F(xiàn)c區(qū)的多肽的Fc區(qū)使得Fc區(qū)的第一多肽鏈與樹脂結合，并且Fc區(qū)的第二多肽鏈不與樹脂結合或與樹脂顯示與第一多肽鏈相比較弱結合的步驟；

[5]如[1]至[4]中任一項所述的方法，其中所述Fc區(qū)的第一多肽鏈包含IgG1，IgG2或IgG4的CH3，并且所述Fc區(qū)的第二多肽鏈包含IgG3的CH3；