[發明專利]提高含FC區多肽純化效率的方法

有效

• 申請號: 201680069093.0
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN108368166B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 田中信幸;百瀨瑠美子
• 申請（專利權）人: 中外制藥株式會社
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K1/22;C12N15/09
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 張瑩

1.一種用于在蛋白A柱層析中增加含Fc區的多肽對蛋白A樹脂的動態結合能力的方法，所述方法包括制備作為Fc區的第一多肽鏈和第二多肽鏈的第一多肽鏈和第二多肽鏈的步驟,所述第一多肽鏈和第二多肽鏈具有與所述樹脂彼此不同的結合活性，其中所述Fc區是IgG4同種型的Fc區，其中根據EU編號在Fc區的第一多肽鏈中的位置435處的氨基酸是His，并且根據EU編號Fc區的第二多肽鏈中的位置435處的氨基酸是Arg。

2.權利要求1所述的方法，其中所述結合能力的增加為5g/L樹脂或更多。

3.權利要求1所述的方法，其中所述增加后的所述動態結合能力為45g/L樹脂或更多。

4.權利要求1所述的方法，其中所述含Fc區的多肽是抗體。

5.權利要求4所述的方法，其中所述抗體是雙特異性抗體。

6.一種使用權利要求1至5中任一項所述的方法純化含Fc區的多肽的方法。

7.一種使用蛋白A樹脂制造含Fc區多肽的方法，其包括以下步驟：

(a)制備Fc區的對所述樹脂具有彼此不同的結合活性的第一多肽鏈和第二多肽鏈，其中所述Fc區是IgG4同種型的Fc區，其中根據EU編號在Fc區的第一多肽鏈中的位置435處的氨基酸是His，并且根據EU編號Fc區的第二多肽鏈中的位置435處的氨基酸是Arg；

(b)比較步驟(a)的含Fc區的多肽在蛋白A柱層析中對蛋白A樹脂的動態結合能力與含有對所述樹脂相同的結合活性的兩條多肽鏈的含Fc區的多肽在蛋白A柱層析中對蛋白A樹脂的動態結合能力；

(c)使包含含有Fc區的第一多肽鏈的多肽和含有Fc區的第二多肽鏈的多肽的樣品與所述樹脂接觸；和

(d)收集與樹脂結合并包含異源多肽的含Fc區多肽，所述異源多肽包含含有Fc區的第一多肽鏈的多肽和含有Fc區的第二多肽鏈的多肽。