[發明專利]稀有細胞的無離心機分離和檢測

在審

• 申請號: 201680065223.3
• 申請日: 2016-09-22
• 公開（公告）號: CN108351347A
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發明（設計）人: 卡格里·A·沙夫倫;張君禮;黃萬鋒
• 申請（專利權）人: 普渡研究基金會
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N33/543;G01N33/551;G01N33/569
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.用于分離流體樣品中的目標實體的添加性的直接稀釋方法，所述方法包括以下述順序進行的下述步驟：

向所述流體樣品中加入所述流體樣品的體積的至少0.5倍體積的稀釋劑以產生第一混合物，其中所述稀釋劑的體積足以獲得低于所述流體樣品的粘度的特定粘度的所述第一混合物；

向所述第一混合物中加入大量綴合有結合部分的磁珠以產生第二混合物，其中所述綴合有結合部分的磁珠中的結合部分能夠特異性結合所述目標實體上表達的一種或多種配體，并且其中加入到所述第一混合物中的綴合有結合部分的磁珠的數量足以使所述目標實體磁化；

將所述第二混合物孵育一段時間，所述時間為至少5分鐘至120分鐘并且足以使所述綴合有結合部分的磁珠結合所述第二混合物中的目標實體，其中所述第二混合物的粘度基本上與所述第一混合物的特定粘度相同，并且其中所述第二混合物的粘度足夠低以抑制所述綴合有結合部分的磁珠與所述流體樣品中的非目標實體的非特異性結合；

使所述第二混合物的一部分以大于1.0mL/分鐘的流速流入流體室；以及

施加磁力以將所述第二混合物中的磁化的稀有目標實體吸引到所述流體室內的分離表面，從而以添加性的方法分離稀有目標實體而不用去除最初流體樣品的任何部分。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述目標實體是稀有細胞。

3.如權利要求1-2中任一項所述的方法，其中所述稀釋劑包含緩沖溶液。

4.如權利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述結合部分是一種或多種不同的抗體，并且所述配體是所述抗體能特異性結合的一種或多種抗原。

5.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其進一步包括：

在使所述第二混合物流入所述流體室之后，使洗滌溶液流入所述流體室。

6.如權利要求1-5中任一項所述的方法，其進一步包括：

在將所述洗滌溶液注入所述流體室之后，使緩沖溶液流入所述流體室。

7.如權利要求1-6中任一項所述的方法，其進一步包括：

在使所述第二混合物流入所述流體室之前，鈍化所述流體室的檢測表面。

8.如權利要求1-7中任一項所述的方法，其中所述流體樣品包括血液，并且所述方法進一步包括：

使用至少1.0ml/分鐘的流速，使紅細胞裂解緩沖液流過所述流體室以從所述分離表面去除紅細胞。

9.如權利要求1-8中任一項所述的方法，其中所述紅細胞裂解緩沖液在1分鐘至10分鐘的時間流過所述流體室。

10.如權利要求1-9中任一項所述的方法，其中所述稀釋劑包括磷酸鹽緩沖鹽水溶液，并且其中所述稀釋劑具有稀釋劑體積比流體樣品體積為1:1至1:4的稀釋比例。

11.如權利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述綴合有結合部分的磁珠的直徑為10納米至50微米。

12.如權利要求1-11中任一項所述的方法，其中所述綴合有結合部分的磁珠與EpCAM抗體綴合。

13.如權利要求1-12中任一項所述的方法，其中使所述第二混合物流入所述流體室包括：

將離開所述流體室的所述第二混合物的至少一部分重新導向至能容納所述第二混合物的所述部分的容器或者能輸送所述第二混合物的所述部分的導管；以及

使來自所述容器或通過所述導管的所述第二混合物的所述部分流入所述流體室的入口。