[發明專利]分子克隆提取和驗證方法

在審

• 申請號: 201680063982.6
• 申請日: 2016-11-04
• 公開（公告）號: CN108603191A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發明（設計）人: 柳兌勛;金孝基;韓孝俊;權圣勛
• 申請（專利權）人: 塞勒密斯株式會社;首爾大學校產學協力團
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6869;G01N33/68;C40B40/08;C40B40/06
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 龐東成;肖軼

1.一種提取和表征分子克隆的方法，所述方法包括：提供其上形成有分子克隆的基板；對所述分子克隆中所需要的那些分子克隆以非接觸的方式施加能量從而從所述基板上提取所需要的分子克隆；將DNA條形碼與所提取的分子克隆的序列化學連接；并通過平行測序確定DNA條形碼連接的序列。

2.如權利要求1所述的方法，其中，所述分子克隆由微生物形成。

3.如權利要求1所述的方法，其中，所述分子克隆通過emPCR形成。

4.如權利要求1所述的方法，其中，所述分子克隆采取直徑為100μm以下的微生物集落的形式。

5.如權利要求1所述的方法，其中，所述基板選自由以下組成的組：從模板復制的基板、其中包括犧牲層的基板、涂覆有犧牲層的基板表面和在電磁場下經歷相變的基板。

6.如權利要求1所述的方法，其中，所述基板包括作為規則排列的孔陣列的微孔結構，每個孔具有1μL以下的體積。

7.如權利要求1所述的方法，其中，所述以非接觸的方式施加能量通過選自由以下組成的組的至少一種方式進行：超聲波施加、氣動壓力和激光施加。

8.如權利要求1所述的方法，其中，所述以非接觸的方式施加能量基于通過入射脈沖激光的脈沖激光燒蝕或輻射壓力噴射。

9.如權利要求1所述的方法，其中，所述化學連接利用酶進行。

10.如權利要求9所述的方法，其中，所述酶是聚合酶。

11.如權利要求10所述的方法，其中，所述條形碼通過多重PCR利用所述聚合酶連接。

12.如權利要求1所述的方法，其中，所述DNA條形碼化學連接到每個所提取的分子克隆的序列的兩端。

13.如權利要求1所述的方法，其中，所述化學連接利用兩組以上DNA條形碼通過組合條形碼編碼進行。

14.如權利要求1所述的方法，所述方法還包括僅取出通過平行測序分析過的所述分子克隆中的特定分子克隆。

15.如權利要求14所述的方法，所述方法還包括利用所取出的分子克隆的DNA表達和產生RNA或蛋白。

16.如權利要求15所述的方法，其中，所述蛋白表達和產生使用細胞或噬菌體完成。

17.如權利要求15所述的方法，所述方法還包括分析所表達的蛋白的結構特征或者所表達的蛋白與其他物質的結合強度。