[發明專利]具有共同輕鏈的轉基因兔

在審

• 申請號: 201680063211.7
• 申請日: 2016-10-27
• 公開（公告）號: CN108347906A
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發明（設計）人: J·普拉策爾
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;C07K16/00;C07K16/28
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 胡志君;黃革生

本文報道了包含人源化輕鏈基因座的轉基因載體，其中所述人源化輕鏈基因座包含(a)衍生自人輕鏈V區段IGKV1?39?01的V基因區段，(b)啟動子，其3’近端連接有所述輕鏈基因區段，和(c)至少一個人IGKJ4 J元件的片段，其5’近端連接有所述輕鏈基因區段。

本文報道了可用于產生生產人抗體的轉基因兔的共同輕鏈基因座。本文還報道了共同輕鏈可變結構域氨基酸序列，包含共同輕鏈可變結構域的多特異性抗體和包含相應共同輕鏈基因座的轉基因兔。

背景技術

多特異性抗體的產生受到鏈錯配導致未配對和錯配副產物形成問題的阻礙。根據所選擇的形式，可以形成這些副產物的不可忽略的數目和量。

已經開發了解決這個問題的不同方法。

為了減少重鏈錯配，已經報道了結入扣(knobs-into-hole)技術(參見例如Ridgway，JB等人，Prot.Eng.9(1996)617-621)或CrossMab形式(參見例如Schaefer，W等人，Natl.Acad.Sci USA 108(2011)11187-11192)。

為了減少輕鏈錯配，可以使用共同輕鏈。這種方法固有地要求對于每個都由一對抗體重鏈可變結構域和抗體輕鏈可變結構域形成的兩個結合位點，必須使用相同的抗體輕鏈可變結構域。

包含人免疫球蛋白基因座的非人動物可以用于產生具有共同輕鏈的單特異性抗體。這些動物中的人免疫球蛋白基因座通常包含減少且有限數量的重鏈種系基因，重排的種系重鏈基因或重鏈V基因區段和單個輕鏈基因。當為了產生抗體而免疫這種非人動物時，引發的免疫應答包含具有多種不同重鏈可變結構域但僅有單一輕鏈可變結構域的抗體。

需要設計并開發適合于配合從頭產生抗體的新型共同輕鏈。因此，這種方法不被認為是開發重組多特異性抗體的首選，因為很可能需要進一步優化并且不得不進行序列修飾。

例如在WO 98/50431，WO 2010/084197，US2013/045492，WO2011/097603和WO2012/148873中報道了共同輕鏈和產生這種共同輕鏈的方法。

在WO 2004/009618中，在SEQ ID NO：1中報道了共同VL(包含在UBS54和K53中)。在SEQ ID NO：18中報道了從針對CD22(克隆B28)、CD72(克隆II-2)和HLA-DR(II類；克隆I-2)的噬菌體獲得的共同輕鏈。

在US 2007/098712中，使用抗Ob-R抗體克隆26和抗HER3抗體克隆18的共同VL序列構建雙特異性抗體。還報道了抗Mpl scFv 12B5(GenBank登錄號AF048775)和抗HER3scFv克隆H6(GenBank登錄號AF048774)利用相同的VL序列和基本上不同的VH序列。

在WO2010/84197中報道了包含重鏈和輕鏈的重組抗體，其中輕鏈包含如SEQ IDNO：8所示的序列。SEQ ID NO：8是V區段VKVI-2-1-(1)-A14(IGKV6D-41*01)的氨基酸序列。共同輕鏈的其他氨基酸序列在SEQ ID NO：12-14中報道。

在US2010/0331527中報道了另一種共同輕鏈方法，其中不同特異性的兩種抗體使用相同的輕鏈。

在WO2011/097603中報道了基于人Vκ1-39Jκ5基因座，人Vκ3-20Jκ1基因座和人VpreBJλ5基因座的工程化人Vκ和Vλ共同輕鏈。

在US2012/0192300，US2012/021409，US2011/0195454和US2013/0045492中報道了共同輕鏈及其制備方法。

在WO2012/018764中報道了遺傳修飾的小鼠以及制備和使用它們的方法，其中小鼠包含用至少一個輕鏈V基因區段和至少一個輕鏈J基因區段替代全部或基本上全部的免疫球蛋白重鏈V基因區段、D基因區段和J基因區段。