[發明專利]含Fc蛋白的表達

有效

• 申請號: 201680054785.8
• 申請日: 2016-09-21
• 公開（公告）號: CN108138147B
• 公開（公告）日: 2022-11-01
• 發明（設計）人: B·哈利;Z·胡;J·C·喬利;A·Y·沈;B·R·斯奈德克爾
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;A61K39/00;C07K16/00;C12N15/79;C12N15/85
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

本發明提供包含含Fc蛋白的組合物，其中基本上所有的Fc結構域都具有C?末端賴氨酸。本發明還提供用于生產所述組合物的宿主細胞、制備所述宿主細胞和組合物的方法、以及其使用方法。

相關申請的交叉引用

本申請要求于2015年9月22日提交的美國臨時專利申請NO.62/222,187的優先權，其公開內容通過引用整體并入本文。

在ASCII文本文件中提交序列表

以下提交的ASCII文本文件的內容通過引用整體并入本文：序列表的計算機可讀形式(CRF)(文件名：146392032640SEQLIST.TXT，記錄日期：2016年8月18日，尺寸：5KB)。

技術領域

本發明涉及包含含Fc蛋白的組合物，其中基本上所有含Fc的蛋白在每個Fc結構域上都具有C-末端賴氨酸。本發明進一步涉及用于產生所述組合物的宿主細胞，制備所述宿主細胞和組合物的方法以及其使用方法。

背景技術

含有Fc結構域的治療性蛋白質，例如單克隆抗體和含有Fc的融合蛋白，已經成為治療疾病，如癌癥、自身免疫疾病和感染的重要藥物，并且目前是增長最快的一類治療劑。參見例如Beck等，Nat Rev Immunol，10，2010。臨床上，基于多肽的治療劑由于其高度的靶特異性和參與免疫應答的能力而表現出有效的活性。參見例如Sidhu，Nat Biotechnol，25,2007。然而，基于多肽的均質治療劑的商業生產是具有挑戰性的，因為多肽會經歷許多修飾，例如不同的二硫化物配對，脫酰胺化，氧化，N-末端谷氨酰胺環化，和不同的聚糖結構。參見例如Carson，Nat Biotechnol，23,2005。此外，多肽修飾的存在及結構一致性對生產條件具有高度敏感性。在生物活性多肽上包含免疫球蛋白Fc結構域，可以為該生物活性劑提供有益的生物學和藥理學性質，包括增加的血漿半衰期以允許延長的治療活性和較低的給藥頻率。參見czajkowsky等，Mol Med，2012年4月。然而，Fc結構域的存在進一步增加了含Fc蛋白產物異質性的可能，例如跨每個Fc結構域上的C端賴氨酸存在的差異。

用于生物藥如含Fc蛋白生產的工業標準要求證明產品在所有臨床和商業批次上的一致性。必須進行多肽產品的可比性研究，以確保生產參數發生變化后的一致性，例如，在I期至III期生產優化、商業規模化、和商品化后更改期間發生的生產參數變化。生產參數變化包括但不限于，細胞培養工藝參數、細胞培養基、宿主細胞、純化、儲存和配制的變化。此外，對于多地點生產，有必要確保所有生產設施的產品一致性。多肽屬性(例如Fc結構域C-末端賴氨酸存在)水平的變異性和異質性，被認為是缺乏生產過程控制的指標。參見，Chirino等，Nat Biotechnol，22,2004；和Kozlowski等人，J Pharm Sci，97,2006。細胞系的差異及其對生產工藝(例如培養條件)的敏感性，影響最終產品的特性。例如，在單克隆抗體(由兩條重鏈組成)的生產過程中，Fc結構域C末端賴氨酸的加工(即切割)可以導致帶有零個、一個或兩個Fc結構域C末端賴氨酸殘基的抗體同種型的混合物。在抗體生產中可觀察到廣泛的Fc結構域C-末端賴氨酸加工，導致整個抗體群體的大百分比帶有零或一個Fc結構域C-末端賴氨酸。參見Dick等，Biotechnol Bioeng，100,2008。因此，Fc結構域C-末端賴氨酸存在的異質性是含Fc的治療性蛋白的生產中的一個獨特挑戰。

已經進行了廣泛的細胞培養條件優化研究，以降低在含Fc蛋白生產期間產生的Fc結構域C-末端賴氨酸存在的異質性。例如，美國專利申請號20130280274已經描述了，控制細胞培養基的重金屬如鋅濃度、細胞培養基的氨基酸濃度，pH和溫度等，對抗體Fc結構域C末端賴氨酸存在的影響。然而，如美國專利申請號20130280274所示，細胞培養參數的優化并沒有消除Fc結構域C-末端賴氨酸存在的異質性。