[發明專利]誘導的擴展的多潛能干細胞、制備及使用方法

有效

• 申請號: 201680047455.6
• 申請日: 2016-08-12
• 公開（公告）號: CN108884436B
• 公開（公告）日: 2021-11-05
• 發明（設計）人: 鄧宏魁;楊楊;劉蓓;徐君
• 申請（專利權）人: 北昊干細胞與再生醫學研究院有限公司;北京大學;北京宏冠再生醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C07K14/54;C07K14/715;C12N5/07;C12N5/074;C12N5/0789;C12N5/0797;C12N5/095;C07K16/38;C07K16/40
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 吳小明

1.一種用于擴展分離的多潛能細胞的細胞潛能的細胞培養基組合物，所述組合物包含來自下組中每個的多潛能性的化學擴展劑(CEP)：

(1)細胞因子，

(2)糖原合酶激酶(GSK)抑制劑，

(3)G蛋白偶聯受體(GPCR)抑制劑，和

(4)聚(ADP-核糖)聚合酶-1(PARP1)抑制劑，

所述多潛能性的化學擴展劑的量有效誘導未經處理的細胞重編程為擴展的多潛能細胞，

其中所述細胞因子是人白血病抑制因子(LIF，“L”)；所述GSK抑制劑是[6-[[2-[[4-(2,4-二氯苯基)-5-(5-甲基-1H-咪唑-2-基)-2-嘧啶基]氨基]乙基]氨基]-3-吡啶甲腈](“C”)；所述GPCR抑制劑是DiM((S)-(+)-馬來酸二甲茚定)(“D”)；并且所述PARP1抑制劑是MiH(鹽酸米諾環素)(“M”)，

其中L的濃度范圍為1-100ng/ml；C的濃度范圍為0.5-5μM；D的濃度范圍為1-5μM，并且M的濃度范圍為0.5-5μM。

2.根據權利要求1所述的組合物，其還包含Rho相關的含有卷曲螺旋的蛋白激酶(ROCK)抑制劑，其中所述ROCK抑制劑是Y27632[(+)-(R)-反式-4-(1-氨基乙基)-N-(4-吡啶基)環己烷甲酰胺+++二鹽酸鹽)]，以0.2至20μM的濃度范圍存在。

3.根據權利要求1-2中任一項所述的組合物，其包含細胞培養基并且進一步地包含內-IWR1(4-[(3aR,4S,7R,7aS)-1,3,3a,4,7,7a-六氫-1,3-二氧代-4,7-橋亞甲基-2H-異吲哚-2-基]-N-8-喹啉基-苯甲酰胺)或XAV939(3,5,7,8-四氫-2-[4-(三氟甲基)苯基]-4H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮。

4.試劑盒，其包含根據權利要求1-3中任一項所述的組合物，其中小分子量化合物以相對量存在以將其放入用于分化的細胞的細胞培養基中以誘導擴展的多潛能性。

5.一種誘導供體細胞中擴展的多潛能性的方法，所述供體細胞選自多潛能的部分或完全分化的細胞，所述方法包括：

用根據權利要求1-3中任一項所述的組合物培養所述供體細胞達有效誘導擴展的多潛能性的一段時間，

其中所述供體細胞選自由以下組成的組：小鼠胚胎干細胞，人胚胎干細胞，和誘導的多潛能干細胞。

6.根據權利要求5所述的方法，其中將所述供體細胞在包含所述CEP的重編程培養基中培養9-20天的時間。

7.根據權利要求6所述的方法，其中所述供體細胞作為單細胞或作為小集落接種。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述供體細胞作為單細胞接種，所述方法進一步包括在包含LCDM的培養基中培養之前，將所述細胞在包含根據權利要求2所述的ROCK抑制劑的細胞培養基中培養12至48小時的時間段。