[發(fā)明專利]增加RNA分子的翻譯效率的UTR

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201680042823.8
• 申請日: 2016-06-30
• 公開（公告）號: CN107849574B
• 公開（公告）日: 2021-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: C·魯?shù)婪?/a>;M·K·阿內(nèi)嘉;M·菲瑞姿;J·蓋革
• 申請（專利權(quán)）人: 埃澤瑞斯公司
• 主分類號: C12N15/67
• 分類號: C12N15/67
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 王永偉;丁秀云

描述了一種RNA分子，其包含(a)編碼多肽的編碼區(qū)；和(b)所述編碼區(qū)上游的一個或多個UTR，所述UTR包含SEQ ID NO：1所示的序列或這樣的序列，其與SEQ ID NO：1相比顯示1至4個取代，并且其導(dǎo)致具有與包含UTR——包含SEQ ID NO：1——的RNA分子相同或更高的翻譯效率的RNA分子；和/或(c)所述編碼區(qū)下游的一個或多個UTR，所述UTR包含SEQ ID NO：2所示的序列或這樣的序列，其與SEQ ID NO：2相比顯示1至7個取代，并且其導(dǎo)致具有與包含UTR——包含SEQ ID NO：2——的RNA分子相同或更高的翻譯效率的RNA分子；其中由所述編碼區(qū)編碼的所述多肽不是細(xì)胞色素b?245α多肽(CYBA)。而且，描述了編碼根據(jù)本發(fā)明的RNA分子的核酸分子。此外，描述了包含根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的載體和包含根據(jù)本發(fā)明的載體的宿主細(xì)胞。此外，描述了包含根據(jù)本發(fā)明的RNA分子和任選的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。而且，描述了包含根據(jù)本發(fā)明的RNA分子的試劑盒。最后，描述了如(b)中所定義的一個或多個UTR和/或如(c)中所定義的一個或多個UTR用于增加將RNA分子的編碼區(qū)翻譯成由所述編碼區(qū)編碼的多肽或蛋白質(zhì)的效率的用途。

本發(fā)明涉及RNA分子，其包含(a)編碼多肽的編碼區(qū)；和(b)所述編碼區(qū)上游的一個或多個UTR，所述UTR包含SEQ ID NO：1所示的序列或這樣的序列，其與SEQ ID NO：1相比顯示1至4個取代，并且其導(dǎo)致具有與包括含有SEQ ID NO：1的UTR的RNA分子相同或更高翻譯效率的RNA分子；和/或(c)所述編碼區(qū)下游的一個或多個UTR，所述UTR包含SEQ ID NO：2所示的序列或這樣的序列，其與SEQ ID NO：2相比顯示1至7個取代，并且其導(dǎo)致具有與包括含有SEQ ID NO：2的UTR的RNA分子相同或更高翻譯效率的RNA分子；其中由所述編碼區(qū)編碼的所述多肽不是細(xì)胞色素b-245α多肽(CYBA)。而且，本發(fā)明涉及編碼根據(jù)本發(fā)明的RNA分子的核酸分子。此外，本發(fā)明涉及包含根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的載體和包含根據(jù)本發(fā)明的載體的宿主細(xì)胞。此外，本發(fā)明涉及包含根據(jù)本發(fā)明的RNA分子和任選的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。而且，本發(fā)明涉及包含根據(jù)本發(fā)明的RNA分子的試劑盒。最后，本發(fā)明涉及如(b)中所定義的一個或多個UTR和/或如(c)中所定義的一個或多個UTR用于增加將RNA分子的編碼區(qū)翻譯成由所述編碼區(qū)編碼的多肽或蛋白質(zhì)的效率的用途。

近年來，信使RNA(mRNA)作為新的藥物實體越來越相關(guān)。與基于DNA的基因治療相反，mRNA不需要被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核中，而是在細(xì)胞質(zhì)中直接翻譯成蛋白質(zhì)(1,2)。這使得mRNA在避免潛在的插入誘變——DNA基因藥物不太可能但存在的風(fēng)險——方面更安全。因此，mRNA療法正成為各種醫(yī)學(xué)適應(yīng)癥中基因和蛋白替代治療的有希望的替代方案(1-4)。然而，不得不克服常規(guī)mRNA的強(qiáng)免疫原性以及有限的穩(wěn)定性以進(jìn)一步建立其臨床適用性。就此而言，mRNA穩(wěn)定性，特別是mRNA的翻譯速率，對于設(shè)想的醫(yī)學(xué)應(yīng)用而言是必要的參數(shù)，因為它決定了例如mRNA藥物的劑量給藥和給藥間隔。

已經(jīng)證實幾種策略在增加穩(wěn)定性和減少由施用于細(xì)胞或生物體的mRNA觸發(fā)的免疫原性應(yīng)答方面都是成功的。其中包括化學(xué)修飾的核苷酸(5)。Kormann等已經(jīng)顯示用2-硫代尿苷(thiouridine)和5-甲基胞苷僅替換25％的尿苷和胞苷殘基足以增加mRNA的穩(wěn)定性以及減少由體外外部施用的mRNA觸發(fā)的先天免疫的激活(WO2012/0195936A1；WO2007024708A2)。

此外，已經(jīng)報道m(xù)RNA中的非翻譯區(qū)(UTR)在調(diào)節(jié)mRNA穩(wěn)定性和mRNA翻譯中起關(guān)鍵作用。已知UTR通過它們與RNA結(jié)合蛋白的相互作用而影響翻譯起始、延伸和終止，以及mRNA穩(wěn)定和細(xì)胞內(nèi)定位(6,7)。根據(jù)UTR內(nèi)的具體動機(jī)，它可以增強(qiáng)或減少mRNA的轉(zhuǎn)換(翻轉(zhuǎn)，turnover)(8-11)。最近，已經(jīng)公布了關(guān)于mRNA半衰期的數(shù)據(jù)和相應(yīng)的UTR序列(12,43)。