[發明專利]用于檢測病毒的改善的組合物和方法

在審

• 申請號: 201680038604.2
• 申請日: 2016-05-06
• 公開（公告）號: CN108350511A
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發明（設計）人: 陳福和;楊文龍;杜啟泓;劉耀南;霍文遜;袁國勇
• 申請（專利權）人: 新興病毒診斷（香港）有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6816
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 王永偉;丁秀云

已經在MERS?CoV和其它人類病源性冠狀病毒中鑒定出高度保守的、短的、非翻譯前導序列，其為這些病毒的高度靈敏且準確的試驗提供了基礎。顯示鎖核酸的使用在針對這些短序列的擴增反應中是有用的。顯示使用鎖核酸的RT?PCR提供了以每個反應10拷貝或更少存在的多種人類病原體冠狀病毒的準確檢測。

本申請要求于2015年5月7日提交的美國臨時申請號No.62/158,490的權益，其特此通過引用以其全部內容并入。

技術領域

本發明領域是病毒——優選地RNA病毒和特別地冠狀病毒和流感病毒——的檢測。

背景技術

背景描述包括可以用于理解典型發明的信息。不承認本文提供的任何信息是現有技術或與本申請要求保護的發明相關，或任何具體地或暗示地被引用的任何出版物是現有技術。

縱觀歷史，病毒(如冠狀病毒，或CoVs)已經不斷地跨越物種障礙，并且一些已經作為重要的人類病原體出現(Lau et al，J Virol 85：11325-11337，2011)。他們對公共健康的臨床意義和臨床影響被最近的流行病——在2003年的SARS和自從2012年以來的MERS——最好地例證(Cheng et al，Clin Microbiol Rev 20：660-694，2007；Chan et al，Clin Microbiol Rev 28：465-522，2015)。本文中所有出版物通過引用被并入，其程度如同每個獨立出版物或專利申請具體地并獨立地表明通過引用被并入的程度相同。在并入的文獻中術語的定義和使用與本文提供的術語定義不一致或相反的情況下，應用本文提供的術語的定義而不應用文獻中該術語的定義。高靈敏的和特定的實驗室診斷性測試對于病例鑒定、接觸追蹤、動物源查找、和對于新型病毒爆發控制的感染控制措施的合理化是必需的。

在細胞培養中病毒的分離是實驗室診斷的金標準。遺憾的是一些重要的新興病原體，包括CoVs，難以在細胞系中培養。此外，許多病毒的培養還需要使用生物安全3級的設備，其在大多數的臨床實驗室中不是常規可用的(Chan et al，J Infect Dis 207：1743-1752，2013)。如進化的MERS流行病所舉例說明的，通過實時RT-PCR的分子診斷已變成用于建立實驗室診斷CoV傳染的選擇方法并在大多數臨床微生物學實驗室中是廣泛可用的(Corman et al，Euro Surveill 17.pii：20285，2012；Corman et al，Euro Surveill17.pii：20334，2012)。普遍接受的是在CoV基因組中高度豐富的基因靶(target)是有用的RT-PCR靶。通過先前建立的RT-PCR試驗，很好地舉例說明了該原則，所述RT-PCR試驗靶向以豐富表達的CoVs的N基因，所述N基因位于該基因組的3’末端(Cheng et al，ClinMicrobiol Rev 20：660-694，2007；Chan et al，Clin Microbiol Rev 28：465-522，2015)。

已知六種冠狀病毒(CoVs)引起人類感染(Chan et al，J Infect 65：477-489，2012；Chan et al，J Formos Med Assoc 112：372-381，2013)。人CoV(HCoV)-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、和HCoV-HKU1主要引起輕度上呼吸道感染，而嚴重急性呼吸綜合征CoV(SARS-CoV)和新型的中東呼吸綜合征CoV(MERS-CoV)頻繁地引起帶有肺外表現的重癥肺炎。然而，眾所周知的是，大多數的CoVs在細胞系中難以培養(5)。對于在大范圍細胞系中迅速復制的MERS-CoV以及在選擇的細胞系中生長的SARS-CoV，生物安全3級設備的要求限制了細胞培養的實際應用(Chan et al，J Infect Dis 207：1743-1752，2013)。