[發明專利]制備治療性蛋白質的方法

有效

• 申請號: 201680037233.6
• 申請日: 2016-04-27
• 公開（公告）號: CN108138214B
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: R·體佳妮;達里爾·培根·桑佩;約翰·羅伯雷;魏甘;何朝梅
• 申請（專利權）人: 動量制藥公司;拜奧法克圖拉公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C12N15/00;C12Q1/04
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 鄭霞

1.一種制備治療性蛋白質的方法，包括用以下核酸轉染膽固醇營養缺陷型且谷氨酰胺營養缺陷型的哺乳動物細胞：(i)編碼3-酮基類固醇還原酶的核酸；(ii)編碼谷氨酰胺合成酶的核酸；(iii)含有氨基糖苷類抗生素抗性基因的核酸；以及(iv)編碼所述治療性蛋白質的核酸。

2.如權利要求1所述的方法，包括以第一、第二和第三載體轉染所述膽固醇營養缺陷型且谷氨酰胺營養缺陷型的哺乳動物細胞，其中所述第一載體包含編碼3-酮基類固醇還原酶的核酸；所述第二載體包含編碼谷氨酰胺合成酶的核酸；且所述第三載體包含含有氨基糖苷類抗生素抗性基因的核酸。

3.如權利要求1或2的方法，進一步包括在用編碼3-酮基類固醇還原酶的核酸轉染期間或之后在不存在外源引入的膽固醇的情況下培養所述細胞。

4.如權利要求1或2的方法，進一步包括在用編碼谷氨酰胺合成酶的核酸轉染期間或之后在不存在外源引入的谷氨酰胺的情況下培養所述細胞。

5.如權利要求3的方法，進一步包括在用編碼谷氨酰胺合成酶的核酸轉染期間或之后在不存在外源引入的谷氨酰胺的情況下培養所述細胞。

6.如權利要求1-2、5任一項的方法，進一步包括在用編碼谷氨酰胺合成酶的核酸轉染之后通過逐漸減少谷氨酰胺濃度培養所述細胞。

7.如權利要求3的方法，進一步包括在用編碼谷氨酰胺合成酶的核酸轉染之后通過逐漸減少谷氨酰胺濃度培養所述細胞。

8.如權利要求4的方法，進一步包括在用編碼谷氨酰胺合成酶的核酸轉染之后通過逐漸減少谷氨酰胺濃度培養所述細胞。

9.如權利要求1的方法，進一步包括在用編碼3-酮基類固醇還原酶的核酸轉染期間或之后在3-酮基類固醇還原酶抑制劑存在的情況下培養所述細胞。

10.如權利要求1的方法，進一步包括在用編碼谷氨酰胺合成酶的核酸轉染期間或之后在谷氨酰胺合成酶抑制劑存在的情況下培養所述細胞。

11.如權利要求1-2、5、7-10任一項的方法，進一步包括在氨基糖苷類抗生素存在的情況下培養所述細胞。

12.如權利要求3的方法，進一步包括在氨基糖苷類抗生素存在的情況下培養所述細胞。

13.如權利要求4的方法，進一步包括在氨基糖苷類抗生素存在的情況下培養所述細胞。

14.如權利要求6的方法，進一步包括在氨基糖苷類抗生素存在的情況下培養所述細胞。

15.如權利要求11的方法，包括在所述氨基糖苷類抗生素以100μg/ml或200μg/ml的濃度存在的情況下培養所述細胞。

16.如權利要求12-14任一項的方法，包括在所述氨基糖苷類抗生素以100μg/ml或200μg/ml的濃度存在的情況下培養所述細胞。

17.如權利要求1的方法，其中所述氨基糖苷類抗性基因包括新霉素抗性基因且所述方法包括用包含所述新霉素抗性基因的核酸轉染所述細胞。

18.如權利要求1的方法，其中所述方法進一步包括從所述細胞回收所述治療性蛋白和在所述回收后測量所述細胞的活力。