[發(fā)明專利]基于PLA2R1表位譜和擴散分析的膜性腎病的預后和監(jiān)測

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201680037097.0
• 申請日: 2016-07-08
• 公開（公告）號: CN108027367A
• 公開（公告）日: 2018-05-11
• 發(fā)明（設計）人: V·L·M·埃斯諾;B·波斯基;G·J·F·朗博;G·多拉
• 申請（專利權）人: 楚尼斯;國家科學研究中心;尼斯索菲婭昂蒂波利斯大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 孟凡宏;王月

本發(fā)明涉及一種基于分析PLA2R1表位譜來評估受試者的特發(fā)性膜性腎病預后的方法。本發(fā)明進一步涉及一種基于分析PLA2R1表位擴散來監(jiān)測特發(fā)性膜性腎病進展的方法。本發(fā)明強調(diào)三個PLA2R1結構域(CysR、CTLD1和CTLD7)參與抗PLA2R1活性，其中兩個(CTLD1和CTLD7)與活動性特發(fā)性膜性腎病更緊密相關，可能通過表位擴散機制相連。

技術領域

本發(fā)明涉及一種基于PLA2R1表位譜分析來評估受試者的膜性腎病預后的方法。本發(fā)明進一步涉及一種基于PLA2R1表位擴散分析來監(jiān)測膜性腎病進展的方法。

背景技術

特發(fā)性膜性腎病(iMN)是一種自身免疫疾病，且是成人腎病綜合征的常見病因。疾病演變隨自發(fā)緩解、持續(xù)性蛋白尿或末期腎病而高度可變。2009年，Beck等人發(fā)現(xiàn)M型磷脂酶A2受體(PLA2R1)是iMN中主要的足細胞抗原。在隨后的研究中，已經(jīng)在53％-80％的iMN患者中廣泛證實抗PLA2R1自身抗體的存在。這些自身抗體的致病作用尚未被證實，但在大多數(shù)研究人群中，抗PLA2R1抗體滴度似乎與疾病活性相關。

然而，來自抗PLA2R1滴度的個體結果預測尚不清楚。實際上，雖然自身抗體在大多數(shù)患者的對癥治療或免疫抑制治療下的緩解期間消失，但是在腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)阻斷下，其在明顯的臨床緩解期間可能持續(xù)存在。此外，大多數(shù)情況下高抗PLA2R1抗體滴度似乎與隨后的腎臟不良結果相關，但一些發(fā)作時自身抗體滴度高的患者表現(xiàn)出抗PLA2R1活性的急劇下降和疾病緩解。

iMN的治療是有爭議的。KDIGO指南(腎臟疾病改善全球結果)建議在所有iMN患者中使用腎素血管緊張素系統(tǒng)的阻斷劑和利尿劑進行支持性對癥治療，僅在腎功能惡化或持續(xù)性腎病綜合征的情況下使用免疫抑制治療。

因此，免疫抑制治療往往只在發(fā)生重大且可能不可逆的并發(fā)癥之后才開始。另一方面，在用對癥治療可能出現(xiàn)緩解的患者中，不必要的早開始免疫抑制是徒勞的。因此，需要更好地預測患有特發(fā)性膜性腎病的患者的結果。

因此，長期以來需要開發(fā)特發(fā)性膜性腎病預后的綜合性、敏感性和特異性的方法。此外，對于使對其治療作出反應的患者分層以便對無效的治療方案提供必要的修改的方法還存在未滿足的需求。

發(fā)明簡述

M型磷脂酶A2受體(PLA2R1)是具有大的胞外區(qū)的180kDa膜受體，所述胞外區(qū)包含7-17kDa的10個不同球狀結構域，即一個富含半胱氨酸的結構域(CysR)、一個纖連蛋白II型結構域(FNII)和八個不同的C型凝集素結構域(CTLD1-8)。各個結構域由約10個氨基酸的小接頭序列分開。

本發(fā)明人首次篩選了一組50名iMN患者對9個PLA2R1突變體的反應性，所述突變體依次缺失該受體的10個胞外結構域中的每一個。本發(fā)明人鑒定了三個不同結構域中的表位：

-PLA2R1的富含半胱氨酸的結構域(CysR)；

-PLA2R1的C型凝集素結構域1(CTLD1)；和

-PLA2R1的C型凝集素結構域7(CTLD7)。

然后，通過蛋白質(zhì)印跡法和ELISA，他們使用這些結構域的眾多可溶形式證實了每個結構域的獨立反應性。然后，發(fā)明人建立了表位特異性ELISA，并將一組69名患者分為三個表位特異性亞組，并分析其表位譜和疾病活性之間的關系。因此，發(fā)明人已經(jīng)表明，在血清采樣中抗CysR的抗PLA2R1反應性與有利結果相關，而抗CTLD1和CTLD7的反應性與活動性疾病和腎臟預后差相關。

此外，他們表明，隨訪期間表位譜可能會改變。抗CTLD1和抗CTLD7抗體隨疾病緩解而消失，且隨疾病復發(fā)再度出現(xiàn)，而抗CysR限制性活性與穩(wěn)定且輕微的疾病活性相關。