[發明專利]高功能性血小板的制造方法

有效

• 申請號: 201680035205.0
• 申請日: 2016-06-16
• 公開（公告）號: CN107709546B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 江藤浩之;中村壯;伊東幸敬;重盛智大;堂田丈明
• 申請（專利權）人: 國立大學法人京都大學;株式會社美加細胞
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;A61K35/19;A61P7/04;C12N15/09;C12N15/113
• 代理公司: 北京銘碩知識產權代理有限公司 11286
• 代理人: 齊雪嬌;金玉蘭

本發明提供一種功能性高的血小板生成促進劑，其包含1種或多種芳香烴受體(Aryl Hydrocarbon Receptor；AhR)拮抗劑以及1種或多種ROCK(Rho?associated coiled?coil forming kinase：Rho相關卷曲螺旋形成激酶)抑制劑。

技術領域

本發明涉及在體外(in vitro)的血小板的制造方法等。

背景技術

在治療與血液有關的疾病時或進行外科治療時，需要用于治療的血球類細胞。在血球類細胞中，作為進行凝血(止血)所必須的細胞的血小板、血小板前體(proplatelet)以及作為生成血小板的細胞的巨核細胞是需求特別高的細胞。特別是血小板，在白血病、骨髓移植、抗癌治療等的需求多，穩定供給非常有必要。

迄今為止，作為在體外生成血小板的方法，開發了使各種干細胞分化而得到巨核細胞，對該巨核細胞進行培養而釋放出血小板的方法。近年來，由于iPS細胞的建立，多能干細胞作為再生醫療中的細胞療法的重要來源，其有用性備受關注。迄今為止，例如，Takayama等成功從人類ES細胞分化誘導出巨核細胞和血小板(非專利文獻1)。

然而，發現迄今為止在體外得到的血小板不具有充分的原本功能，即凝血能力。

另外，在現有的在體外生成血小板的方法中，如果不使用飼養細胞，則難以充分地獲得功能性血小板。然而，飼養細胞大多也利用來源于除人類以外的物種的細胞，在制造用于給予人類的血小板中，優選不使用飼養細胞的方法。

作為迄今為止提出的在體外由造血前體細胞制造血小板的方法的一個例子，提出了在TPO和芳香烴受體(Aryl Hydrocarbon Receptor；AhR)拮抗劑的存在下培養巨核細胞的方法(專利文獻1)。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：國際公開第2014/138485號

非專利文獻

非專利文獻1：Takayama N.et al.,Blood,111,pp.5298-5306,2008

發明內容

技術問題

本發明的課題在于，提供一種在體外高效地從巨核細胞生成功能性高的血小板的方法。

技術方案

本發明人等為了解決上述問題反復進行了研究，其結果發現，如果在AhR拮抗劑的存在下培養巨核細胞，則生成的血小板的數目增加，并且功能也上升，此外，還發現在并用了ROCK抑制劑的情況下不是起到相加作用，而是起到協同作用。此外，對用于得到功能性更高的血小板的培養條件進行了研究，從而完成了本發明。

本發明人等還發現，在巨核細胞中，通過抑制HMGA蛋白質的表達或功能，從而從每單位中的巨核細胞生成的血小板數增加。另外，對該巨核細胞進行視覺上觀察，其結果發生多核肥大化，觀察到分離膜和分泌顆粒的形成，在體外成功地使巨核細胞成熟，從而完成了本發明。

即，本發明涉及，

〔A1〕一種功能性高的血小板生成促進劑，其特征在于，包含1種或多種芳香烴受體(Aryl Hydrocarbon Receptor；AhR)拮抗劑以及1種或多種ROCK(Rho-associated coiled-coil forming kinase：Rho相關卷曲螺旋形成激酶)抑制劑；