[發明專利]制造適于向體細胞分化誘導的干細胞克隆的方法有效
| 申請號： | 201680034787.0 | 申請日： | 2016-04-14 |
| 公開（公告）號： | CN107709543B | 公開（公告）日： | 2021-11-09 |
| 發明（設計）人： | 江藤浩之;遠藤大;重盛智大 | 申請（專利權）人： | 國立大學法人京都大學;株式會社美加細胞 |
| 主分類號： | C12N5/00 | 分類號： | C12N5/00;C12N15/00;C12N15/09 |
| 代理公司： | 北京銘碩知識產權代理有限公司 11286 | 代理人： | 楊敏;金玉蘭 |
| 地址： | 日本京都*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 制造 適于 體細胞 分化 誘導 干細胞 克隆 方法 | ||
1.一種方法，所述方法是從由干細胞分化誘導而得的巨核前體細胞制造二次干細胞克隆的方法，其特征在于，包括：
(i)將巨核前體細胞進行脫分化，從而形成干細胞集落的工序，所述巨核前體細胞是從表達與向體細胞的分化誘導相關的外源性基因的干細胞誘導而得的造血前體細胞分化誘導而得；
(ii)從通過工序(i)形成的干細胞集落，分離出所述外源性基因整合到染色體而成的二次干細胞克隆的工序，
所述外源性基因是MYC家族基因和BMI1基因，或者所述外源性基因是MYC家族基因和BMI1基因以及BCL-XL基因，
工序(i)的脫分化通過從由OCT3/4、SOX2和KLF4組成的組中選擇的重編程因子的導入來實施，通過脫分化得到的細胞為iPS細胞。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括將分離出的二次干細胞克隆的向體細胞的分化誘導效率與克隆化前的干細胞的向體細胞的分化誘導效率相比較的工序。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，分離出表達MEG3的二次干細胞克隆。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述外源性基因與藥物反應性啟動子功能性連結。
5.一種方法，所述方法是制造巨核前體細胞的方法，其特征在于，包括將按照權利要求1～4中任一項所述的方法制造出的二次干細胞克隆向巨核前體細胞分化誘導的工序。
6.一種方法，所述方法是制造血小板的方法，其特征在于，包括：
將按照權利要求1～4中任一項所述的方法制造出的二次干細胞克隆向巨核前體細胞分化誘導的工序；以及
使分化誘導而成的巨核前體細胞成熟為巨核細胞，釋放出血小板的工序。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，還包括使所述二次干細胞克隆中缺失HLA的工序。
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