[發明專利]復數個標的核酸的檢測套組及使用其的檢測方法

有效

• 申請號: 201680031912.2
• 申請日: 2016-05-10
• 公開（公告）號: CN107849617B
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 長野隆志;宮島兼佑;楢原謙次
• 申請（專利權）人: 美之賀美蒂股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/09
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 郭廣迅

1.一種復數個標的核酸的檢測套組，其特征在于，令變性溫度為T0、退火溫度為T1、延長溫度為T2、第2標的檢測溫度為T3時，設定溫度滿足T0T2≧T1T3，

于可含有在前述變性溫度T0下，雙鏈的氫鍵被切斷而分別解離成2條單鏈的第1標的核酸及第2標的核酸的溶液中，含有下述組分：

第1標的用引物，其在前述退火溫度T1下，對前述第1標的核酸解離成的2條單鏈的任一者專一結合；

第2標的用引物，其在前述退火溫度T1下，對前述第2標的核酸解離成的2條單鏈的任一者專一結合；

第1標的用探針，其在前述退火溫度T1下，對前述第1標的核酸解離成的2條單鏈的任一者專一結合，且具有熒光訊號因結合而變化的第1標記物；

DNA聚合酶；

脫氧核糖核苷三磷酸，其在前述延長溫度T2下，透過前述DNA聚合酶的作用，結合至前述第1標的核酸解離成的2條單鏈及前述第2標的核酸解離成的2條單鏈；

第2標的用探針，其在前述退火溫度T1下，不結合至前述第1標的核酸解離成的2條單鏈及前述第2標的核酸解離成的2條單鏈的任一者，且在前述第2標的檢測溫度T3下，對前述第2標的核酸解離成的2條單鏈的任一者專一結合，并且具有熒光訊號因結合而變化的第2標記物；

其中，所述檢測套組置入有1種反應液的1個反應容器且在連貫不間斷的步驟中檢測復數個標的核酸。

2.如權利要求1的復數個標的核酸的檢測套組，其中，前述第1標記物及前述第2標記物是選自于由注冊商標為QProbe的探針、注冊商標為Eprobe的探針及注冊商標為TaqMan的探針構成的群組。

3.如權利要求1或2的復數個標的核酸的檢測套組，其中前述熒光訊號是一退火就消光的熒光訊號。

4.如權利要求1或2的復數個標的核酸的檢測套組，其中前述熒光訊號是一退火就發光的熒光訊號。

5.如權利要求1或2的復數個標的核酸的檢測套組，其中前述第1標的核酸為霉漿菌P1基因，前述第2標的核酸為內部控制。

6.如權利要求1或2的復數個標的核酸的檢測套組，其中前述第1標的核酸為披衣菌內生性質粒基因，前述第2標的核酸為淋病球菌CMT基因。

7.一種使用如權利要求1至6中任一項的測定復數個標的核酸的檢測套組的檢測方法，其含有下述步驟：

解離步驟，其是將前述溶液的溫度提升至前述變性溫度T0，使疑似含有的前述第1標的核酸及前述第2標的核酸分別解離成2條單鏈；

第1標的核酸檢測步驟，其是將前述溶液的溫度降至前述退火溫度T1，并基于源自前述第1標的用探針的熒光訊號，檢測第1標的核酸的存在與否；

擴增步驟，其是將前述溶液的溫度調整成前述延長溫度T2后，將疑似含有的前述第1標的核酸及前述第2標的核酸解離，并將各個2條單鏈擴增成雙鏈的第1標的核酸及第2標的核酸；

第2標的核酸檢測步驟，其是將前述溶液的溫度降至前述第2標的檢測溫度T3，并基于源自前述第2標的用探針的熒光訊號，檢測第2標的核酸的存在與否。