[發明專利]谷氨酸草酰乙酸轉氨酶1(GOT1)、制劑和產生它們的方法及其用途

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• 申請號: 201680031560.0
• 申請日: 2016-03-31
• 公開（公告）號: CN107771217A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: D.米雷曼;A.拉賓科夫;A.魯班;G.喬納;E.哈祖姆;V.布梅里斯;N.馬考斯卡斯;S.蘇德茲尤維伊內;E.納蒙泰特
• 申請（專利權）人: 耶達研究及發展有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C07K19/00;C12N15/62;A61K38/45;A61P35/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 李志強,周李軍

發明的領域和背景

本發明在其某些實施方案中涉及純化的谷氨酸草酰乙酸轉氨酶1 (GOT1)制劑和產生它們的方法。

谷氨酸草酰乙酸轉氨酶1 (GOT1)為一種通過把谷氨酸轉變成α-酮戊二酸來調控谷氨酸血液水平的血清酶。在動物模型中，全身性給予重組谷氨酸草酰乙酸轉氨酶1 (rGOT)已顯示能夠在已知在腦內釋放過多谷氨酸的多種醫學指征之后清除在腦內累積的過多的興奮毒性谷氨酸，所述醫學指征包括缺血性卒中、創傷性腦損傷和腦神經膠質瘤腫瘤。

腦內過多的谷氨酸是引起神經損傷的主要原因之一。多形性膠質母細胞瘤(GBM)型腦瘤的侵襲性和快速生長被認為是無法治愈的。其快速生長及其與疾病相關的神經損傷的原因之一是GBM細胞持續分泌興奮毒性谷氨酸分子，其累積在腦內，引起鄰近腫瘤的正常腦細胞死亡。這轉而也產生了快速腫瘤膨脹需要的顱內空間。

在GBM小鼠模型中共同給予rGOT1和標準治療藥物替莫唑胺(TMZ)明顯延緩腫瘤生長，并且與單獨接受TMZ治療組相比，將其壽命從45天延長至76天(Ruban A等, Invest New Drugs (2012) 30(6): 2226-2235)。

先前已經顯示，在缺血性卒中大鼠模型中給予rGOT1引起的血液谷氨酸水平減少導致腦內累積的過多的興奮毒性谷氨酸分子快速外流(15分鐘內)，通過血腦屏障進入血流(F. Campos, 等, Journal of Cereb. Blood Flow Metabol. 2011, 31, 1387; M. Perez-Mato, 等, Cell Death & Dis. 2014, 5, e992)。

另外的背景技術包括：Prakash等. Microbial Cell Factories 2012, 11:92; Marblestone等, Protein Sci. 2006年1月; 15(1): 182-189; 和美國專利申請第20100021987號。

發明概述

本發明某些實施方案的一個方面提供一種包含谷氨酸草酰乙酸轉氨酶1 (GOT1)多肽分子的蛋白制劑，其中100%的GOT1多肽分子在GOT1多肽的第1位具有丙氨酸，并且其中GOT1多肽分子構成制劑中至少95%的蛋白。

本發明某些實施方案的一個方面提供一種包含本文描述的蛋白制劑作為活性劑和藥學上可接受的載體的藥物組合物。

本發明某些實施方案的一個方面提供一種包含目標多肽和小泛素相關修飾物(SUMO)的融合蛋白，其中目標多肽的N末端翻譯融合至SUMO的C末端，其中融合蛋白缺少異源親和標簽。

本發明某些實施方案的一個方面提供一種包含GOT1和小泛素相關修飾物(SUMO)的谷氨酸草酰乙酸轉氨酶1 (GOT1)融合蛋白，其中GOT1的N末端翻譯融合至SUMO的C末端，其中融合蛋白缺少親和標簽。

本發明某些實施方案的一個方面提供一種編碼本文描述的融合蛋白的分離的多核苷酸。

本發明某些實施方案的一個方面提供一種包含本文描述的分離的多核苷酸的核酸構建體。

本發明某些實施方案的一個方面提供一種在有需要的受試者中治療與谷氨酸過多有關的疾病或病況的方法，所述方法包括給予受試者治療有效量的本文描述的制劑或藥物，從而治療疾病或病況。

本發明某些實施方案的一個方面提供一種純化多肽的方法，所述方法包括：

(a) 在宿主細胞內表達包含多肽和SUMO的融合蛋白，其中多肽的N末端翻譯融合至SUMO的C末端，其中融合蛋白缺少異源親和標簽；

(b) 自融合蛋白去除SUMO；和

(c) 自宿主細胞分離多肽，從而純化多肽。

按照本發明的某些實施方案，蛋白構成制劑中至少98%的分子。

按照本發明的某些實施方案，GOT1包含與SEQ ID NO: 2具有至少90%同源性的氨基酸序列。

按照本發明的某些實施方案，GOT1由SEQ ID NO: 2所示的氨基酸序列組成。

按照本發明的某些實施方案，GOT1在第1位包含丙氨酸。

按照本發明的某些實施方案，親和標簽為多聚組氨酸標簽。

按照本發明的某些實施方案，GOT1的氨基酸序列與SEQ ID NO: 2具有至少90%同源性。

按照本發明的某些實施方案，SUMO的氨基酸序列與SEQ ID NO: 5具有至少90%同源性。