[發(fā)明專利]用于懸浮細胞的小規(guī)模養(yǎng)殖方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201680030077.0
• 申請日: 2016-05-25
• 公開（公告）號: CN108138128A
• 公開（公告）日: 2018-06-08
• 發(fā)明（設計）人: S·戈勒茲;R·施塔恩;S·克雷耶
• 申請（專利權(quán)）人: 葛萊高托普有限公司
• 主分類號: C12N5/02
• 分類號: C12N5/02
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 袁泉

1.用于在懸液中養(yǎng)殖細胞的方法，其包括：

(a)提供細胞培養(yǎng)物；

(b)在細胞培養(yǎng)物中養(yǎng)殖細胞，其中攪動所述細胞培養(yǎng)物；

(c)停止對所述細胞培養(yǎng)物的攪動；

(d)在所述細胞培養(yǎng)物中所述細胞至少部分沉淀后，除去所述細胞培養(yǎng)物的部分培養(yǎng)介質(zhì)；以及

(e)將新鮮培養(yǎng)介質(zhì)加入至所述細胞培養(yǎng)物中。

2.用于模擬在懸液中細胞的大規(guī)模灌注培養(yǎng)的方法，其包括：

(a)提供小規(guī)模細胞培養(yǎng)物，其培養(yǎng)物體積為所述大規(guī)模灌注培養(yǎng)物的10％或更少；

(b)使用待模擬的所述大規(guī)模灌注培養(yǎng)的一個或多個培養(yǎng)條件，在所述小規(guī)模細胞培養(yǎng)物中養(yǎng)殖細胞，其中攪動所述小規(guī)模細胞培養(yǎng)物；

(c)停止對所述小規(guī)模細胞培養(yǎng)物的攪動；

(d)在所述小規(guī)模細胞培養(yǎng)物中所述細胞至少部分沉淀后，除去所述小規(guī)模細胞培養(yǎng)物的部分培養(yǎng)介質(zhì)；以及

(e)向所述小規(guī)模細胞培養(yǎng)物中加入新鮮培養(yǎng)介質(zhì)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其中待模擬的所述大規(guī)模灌注培養(yǎng)的一個或多個培養(yǎng)條件選自培養(yǎng)介質(zhì)、溫度、pH值、氧濃度、細胞密度、細胞營養(yǎng)物的加入包括加入時間和所述培養(yǎng)介質(zhì)中營養(yǎng)物的目標濃度、培養(yǎng)時間、具體的功率輸入、氣體供入速度、灌注速度以及培養(yǎng)介質(zhì)的滲透壓，其中所述培養(yǎng)條件用于在所述小規(guī)模細胞培養(yǎng)物中養(yǎng)殖細胞。

4.篩選用于在懸液中細胞的大規(guī)模灌注培養(yǎng)的培養(yǎng)條件和/或細胞克隆的方法，其包括：

(a)提供小規(guī)模細胞培養(yǎng)物，其培養(yǎng)物體積為所述大規(guī)模灌注培養(yǎng)物的10％或更少；

(b)在所述小規(guī)模細胞培養(yǎng)物中養(yǎng)殖細胞，其中攪動所述小規(guī)模細胞培養(yǎng)物；

(c)停止對所述小規(guī)模細胞培養(yǎng)物的攪動；

(d)在所述小規(guī)模細胞培養(yǎng)物中所述細胞至少部分沉淀后，除去所述小規(guī)模細胞培養(yǎng)物的部分培養(yǎng)介質(zhì)；以及

(e)向所述小規(guī)模細胞培養(yǎng)物中加入新鮮培養(yǎng)介質(zhì)；

其中所述單獨的小規(guī)模細胞培養(yǎng)物在待篩選的培養(yǎng)條件和/或細胞克隆方面是不同的。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述方法，其中所述待篩選的培養(yǎng)條件選自培養(yǎng)介質(zhì)、溫度、pH值、氧濃度、細胞密度、細胞營養(yǎng)物的加入包括加入時間和所述培養(yǎng)介質(zhì)中營養(yǎng)物的目標濃度、培養(yǎng)時間、具體的功率輸入、氣體供入速度、灌注速度以及培養(yǎng)介質(zhì)的滲透壓。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述方法，其中在所述篩選中選擇這些培養(yǎng)條件和/或細胞克隆，其中所述篩選提供了所述細胞在所述細胞培養(yǎng)物中產(chǎn)生的目的生物分子的高細胞活力、高和/或穩(wěn)定的細胞密度、高和/或穩(wěn)定的產(chǎn)率，以及由所述細胞在所述細胞培養(yǎng)物中產(chǎn)生的目的細胞分子的所需的性質(zhì)。

7.根據(jù)權(quán)利要求2至6的任意一項所述方法，其中所述大規(guī)模灌注培養(yǎng)物的體積為至少1升，和/或其中所述小規(guī)模細胞培養(yǎng)物的體積為50ml或更低。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7的任意一項所述方法，其中在步驟(c)中停止所述攪動后，所述細胞的沉淀發(fā)生至少35min，然后在步驟(d)中除去部分所述培養(yǎng)介質(zhì)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至7的任意一項所述方法，其中在步驟(c)中停止所述攪動后，所述細胞的沉淀發(fā)生30min或更少，然后在步驟(d)中除去部分所述培養(yǎng)介質(zhì)，并且其中在步驟(d)中，還除去所述細胞培養(yǎng)物中的部分細胞，從而產(chǎn)生細胞流失。

10.根據(jù)權(quán)利要求1至9的任意一項所述方法，其中在步驟(d)中除去所述培養(yǎng)介質(zhì)的15％至50％和30％；和/或其中在步驟(d)中，從所述細胞培養(yǎng)物的頂部除去所述培養(yǎng)介質(zhì)。

11.根據(jù)權(quán)利要求1至10的任意一項所述方法，其中在步驟(e)中加入新鮮培養(yǎng)介質(zhì)的量基本上與在步驟(d)中除去的培養(yǎng)介質(zhì)的量相同。