[發明專利]用于大皰性表皮松解癥治療的與COL7A1外顯子73配對的寡核苷酸

有效

• 申請號: 201680015142.2
• 申請日: 2016-03-11
• 公開（公告）號: CN107567498B
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: E·M·海斯馬;M·波特曼;W·博伊默;V·布林克斯
• 申請（專利權）人: 翼治療有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 龍淳

本發明涉及能夠防止或減少外顯子73包含到人COL7A mRNA中的反義寡核苷酸，其以多種方式進行表征：(a)寡核苷酸的序列包含至多兩個CpG序列；(b)寡核苷酸的長度不多于24個核苷酸；(c)寡核苷酸能夠與外顯子73中的(SRp40/SC35結合/ESE)元件退火。這些寡核苷酸可有用地為具有修飾的核苷間鍵(例如硫代磷酸酯鍵)的寡核糖核苷酸。

相關申請的交叉引用

本申請要求2015年3月11日提交的英國專利申請1504124.7的優先權，在此出于所有目的將其全部內容并入本文以供參考。

技術領域

本發明涉及適用于治療人類疾病的寡核苷酸。更具體地，本發明涉及適用于治療營養不良型大皰性表皮松解癥的反義寡核苷酸。

背景技術

大皰性表皮松解癥(EB)是一組可遺傳的皮膚疾病，其特征在于皮膚和黏膜的慢性脆性和起皰。根據亞型，EB的癥狀范圍非常廣，從最小的皮膚脆性到具有全身并發癥的非常嚴重的癥狀。全球約35萬患者受影響。在某些形式的EB中，還可以涉及指甲、頭發和牙齒。EB的主要類型包括單純型EB(EBS)、交界型EB(JEB)、營養不良型EB(DEB)和金德樂綜合征(KS)。

DEB影響約25％的EB患者，可顯性或隱性遺傳，并涉及VII型膠原蛋白(COL7A1，聯機孟德爾人類遺傳數據庫(omim)120120)缺陷。COL7A1編碼膠原蛋白VII的α-1鏈。膠原蛋白VII用作真皮上部到致密板(基底膜的部分)的錨原纖維。在翻譯后修飾之后，三個相同的α-1鏈借助它們的膠原三螺旋結構域折疊在一起。隨后，形成反向平行二聚體，其排列以形成錨原纖維。膠原蛋白VII由角質形成細胞和真皮成纖維細胞在皮膚中合成。DEB疾病嚴重程度與在基底膜區域的VII型膠原蛋白表達量大體相關。

顯性營養不良型EB(DDEB)的特點包括可局限于手、腳、肘和膝蓋或可以是全身性的起皰。常見的發現包括瘢痕、粟粒疹、黏膜受累、和異常或缺失指甲。隱性營養不良型EB(RDEB)通常比DDEB更具全身性且更嚴重。除了DDEB的發現之外，RDEB的其他常見表現包括營養失調、貧血、骨質疏松、食管狹窄、生長遲緩、蹼化或引起連指手套狀并指(并指(趾)畸形(pseudosyndactyly))的手指和腳趾的融合、形成肌肉攣縮、牙齒畸形、小口畸形和眼睛瘢痕化。在該組中，鱗狀細胞癌的風險以及來自轉移性鱗狀細胞癌的死亡大大增加。

在基因COL7A1內已知有多于400種不同的突變。最普遍受影響的外顯子中的一個(18％的患者)是具有約40種已知突變的外顯子73，該突變大多數通常是錯義突變或導致提前終止密碼子(PTC)和甘氨酸取代的突變。

目前不存在對DEB的治療，只能進行緩和療護。嚴重形式的RDEB對社會醫療保健預算造成高昂的費用：每名患者每年的敷料和藥物的平均費用約為20萬歐元。

法國國家健康與醫學研究院(Institut National de la Santé et de laRecherche Médicale)(INSERM)的WO2013/053819公開了靶向外顯子73、導致整個外顯子從mRNA跳躍的兩種反義寡核苷酸。缺乏外顯子73的mRNA被翻譯成功能性多肽，該功能性多肽雖然比wt蛋白質短，但其表現與野生型膠原蛋白VIIa非常相似。公開的一種寡核苷酸長度為25個核苷酸，顯示出69％的跳躍效率，而另一種寡核苷酸長度為30個核苷酸，顯示出93％的跳躍效率。

發明內容

盡管WO2013/053819中更長的外顯子跳躍AON似乎顯示出令人滿意的外顯子跳躍效率，但是從開發這種用于人類治療用途的分子的角度來看，其長度和一些其他特點使其不太優選。此外，似乎這種寡核苷酸產生既不代表野生型也不代表不含外顯子73的mRNA的中間條帶。盡管不知道這些條帶是否具有臨床相關性，但是從監管和安全性的角度來看，產生副產物不太優選。因此，仍然需要另外的改進的治療DEB的療法。