[發(fā)明專利]用于增強細胞對肉毒神經毒素的特異性攝取的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201680013526.0
• 申請日: 2016-03-03
• 公開（公告）號: CN108064310B
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發(fā)明（設計）人: 克勞迪婭·姚茨科;卡爾-海因茨·艾澤勒;格爾德·曼德;克勞斯·芬克
• 申請（專利權）人: 莫茨藥物股份兩合公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 北京柏杉松知識產權代理事務所(普通合伙) 11413
• 代理人: 王春偉;劉繼富

本發(fā)明提供了一種增強細胞對神經毒素多肽的特異性攝取的方法，所述方法包括：在允許神經毒素多肽發(fā)揮其生物活性的條件下，將對神經毒素中毒敏感的細胞與所述神經毒素多肽一起孵育一段時間，所述孵育包括以下步驟中的至少一個：(i)K⁺介導的細胞去極化，(ii)減少神經毒素多肽的暴露時間和/或(iii)在神經毒素多肽暴露期間攪動所述細胞，從而增強所述細胞對所述神經毒素多肽的特異性攝取。此外，本發(fā)明涉及一種直接測定細胞中神經毒素多肽的生物活性的方法，所述方法包括：a)在允許神經毒素多肽發(fā)揮其生物活性的條件下，將對神經毒素中毒敏感的細胞與所述神經毒素多肽一起孵育一段時間，所述孵育包括以下步驟中的至少一個：(i)K⁺介導的細胞去極化，(ii)減少神經毒素多肽的暴露時間和/或(iii)在神經毒素多肽暴露期間攪動所述細胞；b)固定所述細胞，并且任選地用洗滌劑透化所述細胞；c)使所述細胞與至少一種特異性結合未裂解底物和神經毒素裂解底物的第一捕獲抗體和至少一種特異性結合神經毒素裂解底物的裂解位點的第二捕獲抗體在允許所述捕獲抗體與所述底物結合的條件下接觸；d)使所述細胞與至少一種特異性結合所述第一捕獲抗體的第一檢測抗體在允許所述第一檢測抗體與所述第一捕獲抗體結合的條件下接觸，從而形成第一檢測復合物，并且使所述細胞與至少一種特異性結合所述第二捕獲抗體的第二檢測抗體在允許所述第二檢測抗體與所述第二捕獲抗體結合的條件下接觸，從而形成第二檢測復合物；e)測定步驟d)中的第一檢測復合物和第二檢測復合物的量；以及f)利用所述第二檢測復合物，計算在所述細胞中被所述神經毒素多肽裂解的底物的量，從而測定所述細胞中所述神經毒素多肽的生物活性。

本發(fā)明提供了一種增強細胞對神經毒素多肽的特異性攝取的方法，該方法包括：在允許神經毒素多肽發(fā)揮其生物活性的條件下，將對神經毒素中毒敏感的細胞與神經毒素多肽一起孵育一段時間，該孵育包括以下步驟中的至少一個：(i)K⁺介導的細胞去極化，(ii)減少神經毒素多肽的暴露時間和/或(iii)在神經毒素多肽暴露期間攪動細胞，從而增強所述細胞對神經毒素多肽的特異性攝取。此外，本發(fā)明涉及一種直接測定細胞中神經毒素多肽的生物活性的方法，該方法包括：a)在允許神經毒素多肽發(fā)揮其生物活性的條件下，將對神經毒素中毒敏感的細胞與神經毒素多肽一起孵育一段時間，該孵育包括以下步驟中的至少一個：(i)K⁺介導的細胞去極化，(ii)減少神經毒素多肽的暴露時間和/或(iii)在神經毒素多肽暴露期間攪動細胞；b)固定細胞，并且任選地用洗滌劑透化細胞；c)使細胞與至少一種特異性結合未裂解底物和神經毒素裂解底物的第一捕獲抗體和至少一種特異性結合神經毒素裂解底物的裂解位點的第二捕獲抗體在允許所述捕獲抗體與所述底物結合的條件下接觸；d)使細胞與至少一種特異性結合第一捕獲抗體的第一檢測抗體在允許所述第一檢測抗體與所述第一捕獲抗體結合的條件下接觸，從而形成第一檢測復合物，并且使細胞與至少一種特異性結合第二捕獲抗體的第二檢測抗體在允許所述第二檢測抗體與所述第二捕獲抗體結合的條件下接觸，從而形成第二檢測復合物；e)測定步驟d)中的第一檢測復合物和第二檢測復合物的量；以及f)利用第二檢測復合物，計算在所述細胞中被所述神經毒素多肽裂解的底物的量，從而測定所述細胞中所述神經毒素多肽的生物活性。