[發明專利]表達埃博拉病毒糖蛋白的基于巨細胞病毒的疫苗

在審

• 申請號: 201680008108.2
• 申請日: 2016-01-28
• 公開（公告）號: CN108367064A
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發明（設計）人: 米夏埃爾·亞瑟·賈維斯;愛斯玲·奧伊費·墨菲;海因里克·費爾德曼;安德烈亞·馬爾齊;伊廉·馬蘇迪·鮑爾斯
• 申請（專利權）人: 普利茅斯大學;加利福尼亞大學董事會;美國政府健康及人類服務部
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 楊青;穆德駿

本發明提供了一種基于皰疹病毒的重組載體，其包含編碼異源抗原的核酸序列和用于控制所述抗原表達的啟動子，其中所述啟動子在選定時間表達以在受試者中提供所需免疫應答。

技術領域

本發明總的來說涉及免疫應答，并且更具體來說，涉及提供差異免疫應答調節的啟動子用法。

本文中引用或參考的所有文獻和在本文中引用的文獻中引用或參考的所有文獻，與本文中或通過參考并入本文的任何文獻中提到的任何產品的任何制造商的說明書、描述、產品說明書和產品單一起，通過參考并入本文，并且可以使用在本發明的實踐中。更具體來說，所有參考文獻通過參考并入本文，其程度如同每個單獨的文獻被具體且單獨地指明通過參考并入本文。

背景技術

皰疹病毒科(Herpesviridae)是一大類在動物、包括人類中引起疾病的DNA病毒。這個科的成員也被稱為皰疹病毒。

所有皰疹病毒都由包裝在被稱為衣殼的二十面體蛋白籠內的編碼100-200個基因的相對大的雙鏈線性DNA基因組構成，所述衣殼本身被包裹在被稱為殼皮的含有病毒蛋白和病毒mRNA兩者的蛋白質層和被稱為包膜的脂雙層膜中。該整個粒子被稱為病毒粒子。

基于巨細胞病毒(CMV)的疫苗以及其他基于皰疹病毒的疫苗，作為我們對抗傳染病和癌癥的武器庫的有希望的補充，正初露端倪。這些基于皰疹病毒的載體(vector)是獨特的，不僅在于它們針對異源編碼的病原體(或癌癥)靶抗原誘導高水平的T細胞免疫力，而且在于所述免疫力的耐久性及其“即時效應物”性質。

CMV是皰疹病毒科β亞類的成員。到目前為止，CMV是表征最為充分的基于皰疹病毒的疫苗載體。

最近已顯示，針對HIV的猴類版本(猿猴免疫缺陷病毒，SIV)的基于RhCMV的疫苗在恒河猴中誘導針對系統性感染的保護——所述保護的水平以前對任何SIV疫苗接種方案從未觀察到。

最近也已顯示，基于CMV的疫苗在使用小鼠CMV(MCMV)的小鼠模型系統中，針對這些多樣化的病原體和疾病例如埃博拉病毒、破傷風和前列腺癌提供保護。

盡管已顯示基于CMV的(和基于其他發育程度較低的皰疹病毒的)疫苗誘導針對編碼的異源靶抗原的顯著水平的T細胞應答，但尚未通過這些載體實現針對這些靶的顯著抗體應答的誘導。這種T細胞偏倚性被視為這些疫苗廣泛應用于靶傳染病和癌癥的限制。大量參考文獻(專利和出版物)提供了證據，支持基于皰疹病毒的疫苗一般不能誘導抗體應答。

發明概述

本發明源自于我們在用表達埃博拉病毒靶抗原(埃博拉病毒糖蛋白，GP)的恒河猴CMV疫苗接種的恒河猴中進行的埃博拉病毒激惹研究的出人意料的發現。

皰疹病毒基因的特征在于它們的表達動力學與皰疹病毒復制周期的關系的差異。基于表達的時間，皰疹病毒基因被分類成立即早期(IE)、早期(E)或晚期(L)基因。

在我們的埃博拉研究之前制造的所有基于RhCMV的載體中，異源靶抗原被置于在IE/E時間表達或仍未定性的異源啟動子之下(基于其他非人類靈長動物皰疹病毒的載體和MCMV的情況也是如此)。相反，在我們的埃博拉研究中使用的CMV載體被設計成通過用埃博拉病毒GP基因替換非必需的Rh112(人CMV UL83直系同源物)基因，將所述埃博拉病毒GP置于RhCMV內源的pp65b啟動子之下。這將GP置于在L時間表達的pp65啟動子的控制之下。這種L啟動子的使用在靈長動物模型中引起與基于CMV和其他皰疹病毒的載體相關的正常免疫應答的完全逆轉。具體來說，它引起由恒河猴CMV疫苗誘導的免疫應答嚴重偏向GP特異性抗體的誘導，并極少誘導GP特異性T細胞應答。