[發明專利]確定TNFα抑制藥及其相應抗藥抗體的量的通用測定法

在審

• 申請號: 201680004923.1
• 申請日: 2016-01-11
• 公開（公告）號: CN107110853A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: P·瓦爾霍
• 申請（專利權）人: 阿通諾米斯公司
• 主分類號: G01N33/542
• 分類號: G01N33/542;G01N33/543;G01N33/564;G01N33/58;G01N33/68;G01N33/94
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司11127
• 代理人: 龐東成,武胐

技術領域

本發明涉及在可能已在TNFα抑制劑藥物治療中發展出抗體反應的患者中監測或測定生物樣品中是否存在TNFα抑制劑藥物及其抗體，例如抗藥抗體(ADA)。

因此，在一個實施方式中，本發明涉及確定包含少于200μl的生物樣品、優選血樣中的TNFα抑制劑藥物的量的方法。

在另一實施方式中，本發明涉及確定包含少于200μl的生物(血液)樣品中的針對TNFα抑制劑藥物的一種或多種抗藥抗體(ADA)的量的方法。

在另一實施方式中，本發明涉及確定包含少于200μl的生物(血液)樣品中的TNFα抑制劑藥物及其抗體的量的方法。

此外，本發明涉及用于確定生物樣品中的TNFα抑制劑藥物及其抗體的量的組件試劑盒。

背景技術

抗腫瘤壞死因子(TNF)療法已成為用于管理若干種慢性免疫炎性疾病的重要手段。目前，已批準三種重組抗TNFα藥物用于各種慢性炎性疾病例如類風濕性關節炎(RA)、克羅恩病和重度牛皮癬患者的臨床應用：1)Remicade^TM(英夫利昔單抗)，小鼠-人IgG1-κ抗TNF-α單克隆抗體，2)Enbrel^TM(依那西普)，人TNF受體2和人IgG1的融合蛋白，以及3)Humira^TM(阿達木單抗)，全人IgG1-κ抗TNF-α單克隆抗體。另外兩種抗TNF-α抗體構建體已經在有相同疾病的患者的關鍵III期臨床試驗中表現出希望：4)Cimzia^TM CDP870(賽妥珠單抗)，人源化抗TNF-α單克隆抗體的聚乙二醇化Fab片段，和5)CNTO 148(戈利木單抗(golimumab))，全人IgG1-κ抗TNF-α單克隆抗體。所有這些蛋白質都顯著降低疾病活動，并且在一些患者中可誘導消退。

然而不幸的是，并不是所有患者都有利地響應于抗TNF-α藥物。一些患者根本不響應(原發性響應失敗)，或者他們最初響應但隨后復發(繼發性響應失敗)，盡管藥物劑量增加和/或施用更頻繁。這些響應失敗的原因并不總是清楚，但個體間甚至個體內的生物利用度和藥代動力學差異可能會導致這個問題。許多研究者、藥物管制機構、健康保險公司和藥物制造商目前已認識到，導致患者發展出抗抗體的藥物免疫原性是個問題。因此，應當監測患者的功能性抗TNF-α藥物的循環水平和抗抗體的發展，從而可以針對個體患者定制給藥，并且可以有效和經濟地提供延長的治療，并且對患者幾乎沒有或沒有風險。

重復輸注后，抗TNF-α藥物的中和作用的形成是個問題，這需要增加劑量或更頻繁地施用藥物，并且由于繼發性響應失敗和/或輸注相關的副作用而可能需要中斷治療；已經在RA患者和其他免疫炎性疾病患者中觀察到這一點。然而，在臨床實踐中，用英夫利昔單抗治療的RA或任何其他慢性炎性疾病的患者可能與隨機臨床試驗中的平均患者有很大差異。例如，即使英夫利昔單抗的初始生物利用度由于藥物的靜脈內給藥而接近100％，藥代動力學的差異可導致個體患者在輸注之間的較長時間內具有不足的藥物水平。這個問題可以因抗體的出現而放大。大量研究報道了RA和克羅恩病患者中針對TNF-α的治療性蛋白質的濃度-效應關系，以及藥物水平與ADA之間的反比關系。

實際上，因誘導針對生物藥物(特別是TNFα抑制劑藥物)的抗體(ADA)而引起的響應失敗越來越多地被認識到。在藥物長期遞送時，即在數月或數年內定期給藥時，針對生物藥物的宿主(患者)抗體的發展有很大相關性。抗TNF-α藥物通常長期遞送。當測量ADA時，重要的是從非中和性ADA中識別出中和性ADA。

宿主抗體的發展可以通過增加劑量來補救，但這通常是延遲的和相當暫時的響應，因為處方劑量通常僅當患者癥狀明顯惡化時增加，并且增加的劑量很可能導致患者免疫系統的進一步放大。通常，更優選的補救措施是更換治療方案并使用另一種TNFα抑制劑藥物。

因此，正確評估患者生物樣品中的抗TNFα藥物(TNFα抑制劑藥物)及其抗體(ADA)的量對醫學從業者構成普遍挑戰。

已經采用不同方法來評估TNFα抑制劑藥物及其抗藥抗體的循環水平。其中一些基于酶免疫測定(EIA)，其中將TNFα抑制劑藥物固定在塑料珠或孔上，并采用抗藥抗體對標記的TNFα抑制劑藥物的結合的橋接作為讀出值。其他測定法通過選擇性吸附來檢測抗藥物抗體和TNFα抑制劑藥物的復合物，例如通過免疫球蛋白TNFα抑制劑的Fab與蛋白A的結合，或抗體對抗輕鏈Fab的結合。