[發明專利]確定TNFα抑制藥及其相應抗藥抗體的量的通用測定法

在審

• 申請號: 201680004923.1
• 申請日: 2016-01-11
• 公開（公告）號: CN107110853A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: P·瓦爾霍
• 申請（專利權）人: 阿通諾米斯公司
• 主分類號: G01N33/542
• 分類號: G01N33/542;G01N33/543;G01N33/564;G01N33/58;G01N33/68;G01N33/94
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司11127
• 代理人: 龐東成,武胐

1.一種確定各自包含少于200μl的一種或多種生物樣品中的一種或多種不同的TNF-α抑制劑的存在和量的方法，所述方法包括以下步驟：

a.提供包含TNF-α和第一綴合部分的第一TNF-α綴合物，

b.提供包含TNF-α和第二綴合部分的第二TNF-α綴合物，所述第二部分能夠在包含TNF-α抑制劑、第一TNF-α綴合物和第二TNF-α綴合物的分子復合物的存在下產生或改善可檢測信號，

c.提供包含第一和第二TNF-α綴合物的反應液，并使所述樣品與所述反應液接觸，由此形成包含潛在含有所述TNF-α抑制劑的所述樣品以及第一和第二TNF-α綴合物的檢測液，

d.檢測步驟c之后的信號變化，和

e.通過將所得結果與內部標準進行比較，確定所述TNF-α抑制劑的量。

2.如權利要求1所述的方法，其中，第一和第二部分為固體顆粒，或者其中，第一部分是酶且第二部分是第一部分的底物，或者其中，第一部分是熒光團且第二部分是第一部分所提供的熒光的調節劑。

3.如權利要求2所述的方法，其中，第一和第二部分均為固體顆粒，并且其中，在所述反應液中加入能夠將一種TNF-α抑制劑與另一種TNF-α抑制劑連接起來的TNF-α抑制劑結合劑。

4.如權利要求2所述的方法，其中，第一部分是辣根過氧化物酶(HRP)且第二部分是HRP的底物。

5.如權利要求2所述的方法，其中，第一部分是熒光團且第二部分是猝滅劑，例如SPARCL系統。

6.如權利要求1至5中任一項所述的方法，所述方法包括以下額外步驟：在步驟d中進行的檢測之前，在所述樣品或反應液中摻入一種或多種已知量的TNF-α抑制劑。

7.一種確定一種或多種各自包含少于200μl的生物樣品中的一種或多種不同的TNF-α抑制劑藥物抗體的存在和量的方法，所述方法包括以下步驟：

a.提供包含TNF-α和第一綴合部分的第一TNF-α綴合物，

b.提供包含TNF-α和第二綴合部分的第二TNF-α綴合物，所述第二部分能夠在包含TNF-α抑制劑和第一TNF-α綴合物以及第二TNF-α綴合物的分子復合物的存在下產生或改善可檢測信號，

c.提供反應液，所述反應液包含第一和第二TNF-α綴合物以及含有已知量的所述TNF-α抑制劑的摻入物，并使樣品與所述反應液接觸，由此形成檢測液，所述檢測液包含：潛在含有所述TNF-α抑制劑藥物抗體的所述樣品、摻入量的所述TNF-α抑制劑以及第一和第二TNF-α綴合物，

d.檢測步驟c之后的信號變化，和

e.通過將所得結果與內部標準進行比較，確定所述TNF-α抑制劑的量，和

f.通過將所得結果與內部標準進行比較，確定所述TNF-α抑制劑抗體是否存在。

8.如權利要求7所述的方法，所述方法包括：步驟a-f至少重復進行一次，其中，使用已知量的所述TNF-α抑制劑的第二摻入物，或者，所述方法包括額外的步驟g和h：提供已知量的所述TNF-α抑制劑的第二摻入物或在步驟d后向所述檢測液中加入所述第二摻入物，并且隨后檢測加入第二摻入物所提供的信號變化，并確定所述樣品中TNF-α抑制劑抗體的量。

9.如前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述TNF-α抑制劑是處方藥物。

10.如權利要求9所述的方法，其中，所述藥物選自依那西普(Enbrel)、英夫利昔單抗(Remicade)、阿達木單抗(Humira)、賽妥珠單抗(Cimzia)和戈利木單抗(Simponi)。

11.一種確定樣品中TNF-α抑制劑藥物和/或TNF-α抑制劑藥物抗體的量的組件試劑盒，所述組件試劑盒包含：

a.權利要求1～5中定義的包含TNF-α和第一綴合部分的第一TNF-α綴合物，

b.權利要求1～5中定義的包含TNF-α和第二綴合部分的第二TNF-α綴合物，

c.各自包含已知量的TNF-α抑制劑的一種或多種摻入物標準溶液。

12.如權利要求11所述的組件試劑盒，其還包含TNFα抑制劑結合劑。

13.如權利要求11或12所述的組件試劑盒，其包含含有不同的TNF-α抑制劑的至少兩種不同的摻入物標準溶液。