[發(fā)明專利]一種制備煙酰胺單核苷酸的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201680003986.5
• 申請(qǐng)日: 2016-07-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108026130B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 傅榮昭;張琦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 邦泰生物工程（深圳）有限公司
• 主分類號(hào): C07H1/00
• 分類號(hào): C07H1/00;C07H19/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種制備煙酰胺單核苷酸的方法，其特征在于：以煙酰胺、ATP和核糖為原料，在煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶、核糖磷酸焦磷酸激酶以及核糖激酶的催化作用下發(fā)生反應(yīng)，制得煙酰胺單核苷酸；所述煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的用量為1-100g/L底物溶液，所述核糖磷酸焦磷酸激酶的用量為1-100g/L底物溶液，所述核糖激酶的用量為1-100g/L底物溶液；所述反應(yīng)在溫度為30-50℃，pH值為6.5-8.5的條件下進(jìn)行；所述反應(yīng)在Mg²⁺和K⁺存在的條件下進(jìn)行。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備煙酰胺單核苷酸的方法，其特征在于：所述反應(yīng)在Tris-HCl緩沖液中進(jìn)行。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備煙酰胺單核苷酸的方法，其特征在于：所述煙酰胺的濃度為1-150mM，所述ATP的濃度為1-50mM，所述核糖的濃度為1-100mM。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備煙酰胺單核苷酸的方法，其特征在于：所述原料中煙酰胺、ATP、核糖的摩爾比為1-4∶1∶1-4。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備煙酰胺單核苷酸的方法，其特征在于：所述原料中煙酰胺、ATP、核糖的摩爾比為1.5∶1∶1.5。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的制備煙酰胺單核苷酸的方法，其特征在于所述煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶為如下(a)或(b)的蛋白質(zhì)：

(a)其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示的蛋白質(zhì)，

(b)在(a)限定的氨基酸序列中經(jīng)過(guò)取代、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸并且以煙酰胺和PRPP為底物具有比氨基酸序列如SEQID NO：2所示的親本高的煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶催化活性的由(a)衍生的蛋白質(zhì)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備煙酰胺單核苷酸的方法，其特征在于所述煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶與如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列相比在選自至少一個(gè)下述位點(diǎn)處具有至少一個(gè)突變：第180位、第182位、第231位、第298位、第338位以及第377位。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備煙酰胺單核苷酸的方法，其特征在于所述煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶具有至少一個(gè)下述突變：F180A、F180W、A182Y、E231A、E231Q、D298A、D298N、D298E、D338N、D338E、D377A、D377N以及D377E。