[發(fā)明專利]寨卡病毒多片段融合蛋白的制備及IgG/IgM抗體檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611272846.6
• 申請日: 2016-12-30
• 公開（公告）號: CN106841601A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設計）人: 吳英松;鄧傳歡;董志寧;李志雄
• 申請（專利權）人: 廣州市達瑞生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/531;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種寨卡病毒多片段融合蛋白的制備及IgG/IgM抗體檢測試劑盒，其特征在于應用生物信息學技術分析比較寨卡病毒與登革熱病毒基因序列，選取寨卡病毒特有的線性表位進行多表位融合表達純化，并優(yōu)選出重組蛋白ZIKV-Ag2作為診斷抗原，用膠體金標記來檢測樣本中寨卡病毒；且試劑盒包括1)檢測試劑卡、2)樣品處理液和3)分隔并集中包裝這些試劑瓶或管的包裝盒。

2.一種寨卡病毒多片段融合蛋白的制備及IgG/IgM抗體檢測試劑盒，其特征在于寨卡病毒多片段融合蛋白的制備過程包括以下步驟：

1)生物信息學比對：選取寨卡病毒與登革熱病毒基因全長序列進行生物信息學比對分析，分析寨卡病毒特異的線性抗原表位；

2)特異基因片段的組合：篩選出寨卡病毒特異的線性抗原表位對應的基因片段序列1、2、3；并對片段1、2、3分別進行單獨或組合，分別為①片段1；②片段2；③片段3；④片段1+片段2融合；⑤片段1+片段3融合；⑥片段2+片段3融合；⑦片段1+片段2+片段3融合；

4)基因片段的克隆表達與純化：將7種基因片段組合各自進行PCR引物設計、擴增、構建重組質粒并誘導表達，經提取重組質粒并進行酶切、測序驗證后大量誘導表達融合蛋白；

5)交叉配對實驗：將4)中獲得的融合蛋白標記金分別與抗人IgG單克隆抗體、抗人IgM單克隆抗體進行交叉配對實驗，確定與單克隆抗體配的對靈敏度、特異度最高的融合蛋白，即為用于金標診斷的抗原；

6)制備膠體金試劑：利用5)中篩選出的抗原制備寨卡病毒IgG/IgM抗體膠體金檢測試劑。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于該試劑盒中的檢測試劑卡由1)樣品墊、2)膠體金結合墊、3)層析膜、4)吸水材料和5)襯板組成，且上述1)～4)首尾互相銜接并附著在5)上；且所述膠體金結合墊為包被有金標記融合抗原ZIKV-Ag2以及金標記鏈霉親和素的玻璃纖維膜；層析膜為包被有抗人IgG單克隆抗體A371、抗人IgM單克隆抗體A372、生物素-BSA的硝酸纖維素膜；襯板為PVC材質。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于該試劑盒中的樣品處理液由1～50mg/mL的異嗜性抗體阻斷劑和0.02％～0.06％NaN₃防腐劑組成。