[發明專利]一種IpostC在抗腸再灌注損傷中所起作用的實驗方法

在審

• 申請號: 201611271893.9
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN108245687A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 賈中芝
• 申請（專利權）人: 賈中芝
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種IpostC在抗腸再灌注損傷中所起作用的實驗方法，包括以下步驟：腸IPostC對HIF?1α和miR?21表達的影響、HIF?1α對miR?21的調控、miR?21在IPostC下的作用和HIF?1α和miR?21在IPostC下的作用機制。本發明針對臨床上缺乏有效的防治腸再灌注損傷這一難點入手，從分子、細胞和組織水平，通過構建SD大鼠I/R損傷模型，充分證實了HIF?1α和miR?21在腸IPostC抗再灌注損傷中的作用和機制，為防治腸再灌注損傷提供新方法和新靶點。

技術領域

本發明涉及一種IpostC在抗腸再灌注損傷中所起作用的實驗方法。

背景技術

腸缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷是臨床上常見的危重疾病，病理表現主要為小腸上皮細胞凋亡。嚴重感染、燒傷、急性失血、創傷、休克、腸系膜動脈病變、腸移植等多種疾病均可導致腸I/R損傷。腸I/R損傷不僅可以引起腸粘膜屏障功能受損、腸壞死，而且可以激發機體免疫反應，造成大量相關炎癥介質和細胞因子釋放，導致全身性炎癥反應綜合征，甚至多器官功能障礙綜合征，死亡率在60％～80％。在腸I/R損傷的救治過程中，所有患者均存在不同程度的再灌注損傷，部分患者出現腸壞死、感染性休克，甚至膿毒血癥，最終危及患者生命。因此，腸再灌注損傷的防治一直以來都是醫學研究領域中亟待解決的難題。

現有研究表明，HIF-1和miR-21在腎臟缺血中具有重要的抗再灌注損傷作用。HIF-1作為調節氧穩態的核心轉錄因子，廣泛地表達于哺乳動物的各種組織細胞，能激活多種低氧反應性基因的表達，促進機體和細胞對缺氧缺血的耐受，在機體的病理和生理過程中起著關鍵作用。HIF-1是由缺氧敏感性的α-亞單位 (HIF-1α)和基礎表達的β-亞單位(HIF-1β)形成的異二聚體，其中IF-1α是主要的功能亞基，對HIF-1的轉錄活性起關鍵作用。因此，目前有關HIF-1的研究大部分集中在其功能亞基HIF-1α上。HIF-1α對機體缺氧耐受具有至關重要的作用。研究證實，在缺血的腸粘膜組織中，HIF-1α表達明顯增高。

而miR-21在眾多腫瘤中呈現出癌基因樣的作用，在腫瘤的發生發展、增殖、凋亡、耐藥、侵襲、轉移等多種生物學行為中發揮著重要的作用，同時它也是一個重要的預后預測因子。在缺血的腸粘膜組織中，HIF-1α表達明顯增高，HIF-1 α可通過與啟動子結合轉錄調控miR-21，miR-21通過抑制PDCD4、FasL等促凋亡靶點而實現抗凋亡作用。

因此推測，在IPostC抗腸再灌注損傷中，HIF-1α可能通過調控miR-21，靶作用于促凋亡基因PDCD4、FasL抑制凋亡，發揮抗再灌注損傷的保護作用。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提供一種IpostC在抗腸再灌注損傷中所起作用的實驗方法，以研究HIF-1α和miR-21在腸IPostC抗再灌注損傷中的作用和機制，為防治腸再灌注損傷提供新方法和新靶點。

本發明所采用的技術方案如下：

一種IpostC在抗腸再灌注損傷中所起作用的實驗方法，包括以下步驟：

1)、腸IPostC對HIF-1α和miR-21表達的影響

構建SD大鼠I/R損傷模型，檢測IPostC下HIF-1α和miR-21的表達情況；

2)、HIF-1α對miR-21的調控

CoCl₂處理小腸上細胞株IEC-6，觀察HIF-1α、miR-21的表達情況

3)、miR-21在IPostC下的作用

利用SD大鼠構建I/R損傷模型，IPostC前用anti-miR-21或anti-scrambled 干預大鼠，觀察標本大體，進行病理形態學、細胞凋亡水平、腸組織濕/干比重 (W/D)分析，檢測miR-21的表達情況；