[發明專利]一種IpostC在抗腸再灌注損傷中所起作用的實驗方法

在審

• 申請號: 201611271893.9
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN108245687A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 賈中芝
• 申請（專利權）人: 賈中芝
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.IpostC在抗腸再灌注損傷中所起作用的實驗方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)、腸IPostC對HIF-1α和miR-21表達的影響

構建SD大鼠I/R損傷模型，檢測IPostC下HIF-1α和miR-21的表達情況；

2)、HIF-1α對miR-21的調控

CoCl₂處理小腸上細胞株IEC-6，觀察HIF-1α、miR-21的表達情況

3)、miR-21在IPostC下的作用

利用SD大鼠構建I/R損傷模型，IPostC前用anti-miR-21或anti-scrambled干預大鼠，觀察標本大體，進行病理形態學、細胞凋亡水平、腸組織濕/干比重分析，檢測miR-21的表達情況；

4)、HIF-1α和miR-21在IPostC下的作用機制

利用HIF-1α基因沉默的SD大鼠構建I/R損傷模型，IPostC前用anti-miR-21或anti-scrambled干預大鼠，觀察標本大體，進行病理形態學、細胞凋亡水平、腸組織濕/干比重分析，檢測對HIF-1α、miR-21的表達情況；檢測對靶基因PDCD4、Fas-L表達情況的影響。

2.如權利要求1所述的一種IpostC在抗腸再灌注損傷中所起作用的實驗方法，其特征在于，所述實驗方法包括體外實驗和體內實驗。

3.如權利要求2所述的一種IpostC在抗腸再灌注損傷中所起作用的實驗方法，其特征在于，所述體外實驗選用大鼠小腸隱窩上皮細胞-IEC-6，包括如下步驟：

1)、IEC-6細胞體外培養

2)、CoCI₂化學缺氧法模擬缺氧環境

3)、IEC-6細胞基因轉染

4)、IEC-6細胞凋亡水平檢測

5)、IEC-6細胞基因表達測定。

4.如權利要求2所述的一種IpostC在抗腸再灌注損傷中所起作用的實驗方法，其特征在于，所述體內實驗選用大鼠腸R/I損傷模型，包括如下步驟：

1)、SD大鼠I/R損傷模型構建

2)、標本制備

3)、檢測指標

檢測指標包括大體觀察、病理形態學變化及細胞調亡水平，腸組織濕/干比重以及HIF-1α、miR-21、PDCD4、FasL及各通路蛋白表達檢測。

5.如權利要求4所述的一種IpostC在抗腸再灌注損傷中所起作用的實驗方法，其特征在于，所述SD大鼠I/R損傷模型構建如下：

大鼠禁食后腹腔注射20％烏拉坦麻醉；麻醉成功后肌肉松弛，角膜反射減弱，心跳呼吸平穩，仰臥固定于操作板上；嚴格按無菌操作，消毒后取劍突下、腹正中切口長3cm進腹，用溫鹽水紗布將小腸及結腸推向左下腹，輕柔分離周圍組織，暴露右腎內上方的腸系膜根部，找到腸系膜上動脈，無創血管夾夾閉，觀察到SMA搏動消失及腸壁色澤變蒼白的同時開始腸缺血計時，缺血至預定的觀察時間后準時松開血管夾，觀察SMA搏動恢復、腸壁變潮紅及壞死情況；待腸壁變潮紅，再次絲線全層縫合暫時關腹。