[發明專利]PEG修飾蛋白的PEG結合數檢測方法有效
| 申請號： | 201611270257.4 | 申請日： | 2016-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN108267590B | 公開（公告）日： | 2021-05-11 |
| 發明（設計）人： | 馬永;顏莎;王俊 | 申請（專利權）人： | 江蘇眾紅生物工程創藥研究院有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N1/38 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 213125 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | peg 修飾 蛋白 結合 檢測 方法 | ||
【權利要求書】：
1.PEG修飾蛋白中PEG結合數的檢測方法，具體步驟如下：
供試品溶液的制備：取一定量的已知PEG修飾蛋白含量的供試品溶液，高溫處理后，加入胰酶溶液，于水浴酶解，備用；
PEG標準品梯度溶液的制備：精密稱取與待測樣品相同的PEG粉末，加水定溶解，制成含量既定的PEG標準品溶液，混勻，放置;分別取間隔一定數值的不同體積的PEG標準品溶液加入純化水中配制成終體積相同的梯度濃度溶液，混勻，即得標準品梯度溶液；
樣品的制備和上樣：分別取上述標準品梯度溶液和供試品溶液，進行SDS-PAGE電泳實驗，并以碘染色法進行顯色后，即可拍照；
數據測定與計算：將照片使用Quantity One 4.4.0軟件對各染色泳道進行定量測算灰度值；并根據PEG標準品梯度溶液的染色泳道的灰度值對應其相應的濃度，繪制PEG標準品的濃度與灰度值的標準曲線；將供試品溶液的對應染色泳道的灰度值代入標準曲線，計算得到供試品溶液中的所有游離PEG含量；
PEG結合數計算：根據以上結果計算PEG結合數，計算公式如下：
PEG結合數=PEG摩爾數÷蛋白摩爾數=PEG質量÷PEG分子量÷蛋白質量×蛋白分子量。
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