[發明專利]米根霉菌株及用其制備高活力固體菌劑的方法

有效

• 申請號: 201611267396.1
• 申請日: 2016-12-31
• 公開（公告）號: CN106591152B
• 公開（公告）日: 2019-07-05
• 發明（設計）人: 周長春;許正宏;陸震鳴;史勁松;房華;周鳳云
• 申請（專利權）人: 沂源康源生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12J1/04;C12R1/845
• 代理公司: 青島發思特專利商標代理有限公司 37212
• 代理人: 馬俊榮

本發明涉及一種米根霉菌株及用其制備高活力固體菌劑的方法，屬于米根霉的應用技術領域。本發明所述的米根霉菌株，為擬青霉(Paecilomyces)屬中的米根霉菌株HP25?3#，該菌株的保藏編號為CGMCC No.12078。所述的利用米根霉菌株制備高活力固體菌劑的方法，依次包括液體種子培養、靜置發酵、發孢培養、低溫烘干和磨料制粉。本發明所述的米根霉菌株，生長迅速、環境適應能力強，具有高產L?乳酸的能力；同時本發明提供了一種利用米根霉菌株制備高活力固體菌劑的方法，簡單易行，成本低，便于工業化生產，具有良好的市場應用前景。

技術領域

本發明涉及一種米根霉菌株及用其制備高活力固體菌劑的方法，屬于米根霉的應用技術領域。

背景技術

L-乳酸是一種重要的有機酸，廣泛應用于食品、醫藥、農業和化工中，利用L-乳酸制備的聚L-乳酸是一種新型的可生物降解材料。細菌發酵和真菌發酵是發酵生產L-乳酸的主要方法，其中米根霉具有營養要求簡單、生長迅速、環境適應能力強、分泌有機酸及淀粉酶的能力強、可進行同步糖化發酵、產酸光學純度高等優點，是工業化生產最有潛力的菌株之一。

米根霉目前主要被廣泛應用于生物防治領域，其發酵生產工藝是以生產米根霉孢子為目的的，所制備的米根霉菌劑也是以孢子菌劑為主。

發明內容

本發明的目的在于提供一種米根霉菌株，其生長迅速、環境適應能力強，具有高產L-乳酸的能力；同時本發明提供了一種利用米根霉菌株制備高活力固體菌劑的方法，簡單易行，成本低，便于工業化生產，具有良好的市場應用前景。

本發明所述的米根霉菌株，該菌株為擬青霉(Paecilomyces)屬中的米根霉菌株HP25-3#，該米根霉菌株已于2016年1月18日，保藏至中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，分類命名為米根霉(Rhizopus oryzae)，保藏編號為CGMCC No.12078。

米根霉菌株是從山東省淄博市沂源縣大張莊鎮被禾谷孢囊線蟲(Heteroderaavenae)侵染的小麥根部土壤中采用PDA平板根據菌落形態初篩及搖瓶發酵根據L-乳酸產量復篩的方法所得的高產孢菌株。

所述的米根霉菌株，是利用通用引物PCR擴增該菌的ITS rRNA基因，得到所述的3#菌株的ITS rRNA基因序列614bp，應用BLAST程序與數據庫中的已有真菌ITS rRNA序列進行相似性比較分析，3#菌株的基因序列與米根霉HP25相似性為99％。

所述的利用米根霉菌株制備高活力固體菌劑的方法，包括以下步驟：

(1)液體種子培養：將米根霉3#接種到液體種子培養基中，培養后獲得種子培養液；

(2)靜置發酵：將步驟(1)所得的種子培養液接種到固體發酵培養基中，發酵培養；

(3)發孢培養：將步驟(2)所得的固體發酵產物轉移至淺盤進行發孢培養，繼續培養40-48h后孢子成熟；

(4)低溫烘干：將步驟(3)所得的發酵產物移至低溫烘干室進行烘干，得到固體菌劑，其水分質量百分含量為6-8％；

(5)磨料制粉：將步驟(4)所得的菌劑進行研磨，磨料機篩孔不低于120目。

所述液體培養基由以下重量百分含量的原料制成：葡萄糖1-10％，麩皮0.5-5％，玉米漿0.1-0.5％。通過調節初始階段玉米漿的添加濃度0.1-0.5％，可以控制米根霉菌球直徑為2.0～2.5mm。

步驟(1)中，米根霉3#與液體種子培養基的裝液量體積之比為1:4～6。

步驟(1)中，26-30℃、130-170rpm下培養34-38h。