[發明專利]裂殖壺菌WZYU011及其生產凝乳酶的方法

有效

• 申請號: 201611266502.4
• 申請日: 2016-12-31
• 公開（公告）號: CN107245451B
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 于欣君;汪釗;陳虹;葛佳煒
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/58;C12R1/645
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

本發明公開了一種裂殖壺菌WZYU011及其生產凝乳酶的方法，將裂殖壺菌通過斜面培養、種子培養和發酵培養即可得到凝乳酶粗酶液。該方法首次使用裂殖壺菌在包含葡萄糖、蛋白胨、酵母粉和海鹽等廉價原料的培養基中快速生產凝乳酶，避免了在培養基中另外添加鈣和鎂等無機鹽，大大降低了生產成本；且整個工藝流程簡單，設備要求低，可控性強，適用于工業化生產。利用本發明所述制備方法所得凝乳酶具有較高的酶活力,可以滿足工業化生產凝乳酶的需求。

(一)技術領域

本發明涉及一種凝乳酶的制備，特別涉及一種利用裂殖壺菌生產凝乳酶的方法。

(二)背景技術

裂殖壺菌(Aurantiochytrium sp.)是一種海洋類真菌的異養型微生物，其細胞中富含DHA等重要多不飽和脂肪酸，已成為世界上最常用的DHA高產菌株。裂殖壺菌分布于海洋生境，能夠利用自身的多酶體系高效分解環境基質，滿足自身快速生長的需求，其數量級甚至超過細菌，而且作為分解者參與海洋環境物質循環，具有重要的生態學意義。

凝乳酶是奶酪生產中使牛奶凝固的關鍵酶，屬于酸性蛋白酶，又稱天冬氨酸蛋白酶，其產值占整個酶制劑總產值的15.5％，市場需求量巨大。凝乳酶的傳統來源是哺乳期小牛的皺胃，因其具有較高的凝乳和蛋白水解能力而成為奶酪制作的首選酶。然而動物來源的酶成本昂貴，且提取程序和工藝較為復雜，已不能滿足現代工業對于凝乳酶的要求。所以，研究者不斷尋求新的凝乳酶資源。微生物具有生長速度快、生產成本低、占地面積小和易于控制生產條件等優點，而且微生物凝乳酶多屬胞外酶，提取方便，使其具有較好的發展前景。目前微生物凝乳酶主要由米黑毛霉、微小毛霉和粟疫霉等霉菌通過固態發酵生產，霉菌容易產生菌絲體，影響產酶；另外與固態發酵相比，液態發酵技術具有發酵時間短、過程易于控制和產量高等優勢。而關于裂殖壺菌來源的凝乳酶及其液態發酵生產的研究并未見報道。裂殖壺菌已通過FDA安全認證，中國衛生部也將其加入安全的食品添加劑名錄，故廣泛應用于食品和飼料工業。該菌能夠利用廉價基質快速生長，很大程度上降低了其發酵產品的成本，有利于工業化生產。

(三)發明內容

本發明目的是提供一種新菌株--裂殖壺菌(Aurantiochytrium sp.)WZYU011及利用裂殖壺菌WZYU011高效生產凝乳酶的方法。本發明首次使用已通過食品安全認證的海洋微生物裂殖壺菌，采用廉價原料高效生產凝乳酶，有效降低了凝乳酶的生產成本，且整個工藝流程簡單，設備要求低，可控性強，適用于工業化生產。

本發明采用的技術方案是：

本發明提供一株新菌株--裂殖壺菌(Aurantiochytrium sp.)WZYU011，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號：CCTCC NO:M 2016619，保藏日期為：2016年11月7日，保藏地址為中國武漢，武漢大學，郵編430072。

本發明還提供一種利用裂殖壺菌WZYU011生產凝乳酶的方法，所述方法為：將裂殖壺菌WZYU011接種至發酵培養基中，在25-35℃下，50-600rpm振蕩培養，得到發酵液，將發酵液離心，棄細胞沉淀，得到含凝乳酶的粗酶液，將粗酶液分離純化，獲得凝乳酶；所述發酵培養基組成為：葡萄糖40-120g/L，酵母粉10-20g/L，蛋白胨5-20g/L，海鹽20g/L，溶劑為水，pH值自然。

進一步，所述裂殖壺菌WZYU011接種前先進行斜面活化和種子擴大培養：(1)斜面培養：將裂殖壺菌WZYU011接種于斜面培養基上，25-35℃下培養1-3天；所述斜面培養基組成為：葡萄糖20g/L，酵母粉10g/L，蛋白陳5g/L，海鹽20g/L，瓊脂20g/L，溶劑為水，pH值自然；(2)種子培養：將斜面培養基上的菌體接入含100mL種子培養基的500mL三角瓶中，在25-35℃下，50-300rpm震蕩培養1-3天，得到種子液；所述種子培養基組為：葡萄糖60g/L，酵母粉10g/L，蛋白陳5g/L，海鹽20g/L，溶劑為水，pH值自然。