[發明專利]一種西曲瑞克的制備方法

在審

• 申請號: 201611265510.7
• 申請日: 2016-12-30
• 公開（公告）號: CN108264540A
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: 王衛國;章方良;劉文玉
• 申請（專利權）人: 江蘇金斯瑞生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/23
• 分類號: C07K7/23;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 夏平;李曉峰

1.一種西曲瑞克的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)制備Fmoc-D-Ala-樹脂復合物：用二甲基甲酰胺溶解C端氨基酸Fmoc-D-Ala-OH及酯化試劑后，加入到用二甲基甲酰胺浸泡處理后的樹脂中進行酯化反應，反應結束后，用二甲基甲酰胺洗滌樹脂，得到Fmoc-D-Ala-樹脂復合物；

(2)制備保護的西曲瑞克-樹脂復合物：向步驟(1)得到的Fmoc-D-Ala-樹脂復合物中加入Fmoc脫保護試劑進行Fmoc脫保護反應，反應結束后過濾并用二甲基甲酰胺洗滌樹脂，然后向脫保護的Fmoc-D-Ala-樹脂復合物中加入西曲瑞克的C端第二個氨基酸和縮合試劑進行縮合反應，縮合反應結束后用二甲基甲酰胺洗滌樹脂；按照西曲瑞克從C端到N端的順序，更換氨基酸，重復Fmoc脫保護反應和縮合反應，得到保護的西曲瑞克-樹脂復合物；

(3)制備脫保護的西曲瑞克-樹脂復合物：向保護的西曲瑞克-樹脂復合物中加入切割試劑，脫除多肽側鏈保護基；反應結束后過濾，并加入洗滌溶劑洗滌樹脂，過濾，得到脫保護的西曲瑞克-樹脂復合物；

(4)制備西曲瑞克粗品：向脫保護的西曲瑞克-樹脂復合物中加入氨解試劑，反應結束后，過濾，收集濾液，旋蒸后得到西曲瑞克粗品；

(5)制備西曲瑞克精品：采用反相高效液相色譜分離純化西曲瑞克粗品，得到西曲瑞克精品。

2.根據權利要求1所述的西曲瑞克的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述的樹脂為Merrifield樹脂、羥甲基樹脂、4-羥甲基苯乙酰胺甲基樹脂或4-羥甲基苯甲酰胺甲基樹脂。

3.根據權利要求1所述的西曲瑞克的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述的酯化試劑包含N,N-二環己基碳二亞胺和N,N-二異丙基碳二亞胺中的任意一種以及1-羥基苯并三氮唑和二甲氨基吡啶；

所述的Fmoc-D-Ala-OH、N,N-二環己基碳二亞胺和N,N-二異丙基碳二亞胺兩者中的任意一種以及1-羥基苯并三氮唑的物質的量的比例為1：1.2～1：1.2～1；所述的Fmoc-D-Ala-OH與樹脂的物質的量的比例為7～3：1；所述的二甲氨基吡啶與樹脂的物質的量的比例為0.5～0.1：1；所述酯化反應的溫度為20℃～60℃，反應時間為3小時～20小時。

4.根據權利要求1所述的西曲瑞克的制備方法，其特征在于：步驟(2)中所述的Fmoc脫保護試劑是體積比為1：1～4的哌啶與二甲基甲酰胺，所述Fmoc脫保護反應的溫度為20℃～60℃，反應時間為10min～60min。

5.根據權利要求1所述的西曲瑞克的制備方法，其特征在于：步驟(2)中所述的氨基酸依次分別為：N-芴甲氧羰酰基-脯氨酸，N-芴甲氧羰-2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺酰-精氨酸，N-芴甲氧羰酰基-亮氨酸，N-芴甲氧羰酰基-D-瓜氨酸鹽酸鹽，N-芴甲氧羰酰基-O-叔丁基-酪氨酸，N-芴甲氧羰酰基-O-叔丁基-絲氨酸，N-芴甲氧羰酰基-D-3-吡啶-丙氨酸，N-芴甲氧羰酰基-D-4-氯-苯丙氨酸，以及乙酰基-D-3-(2-萘基)-丙氨酸。