[發(fā)明專利]一種西曲瑞克的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611265510.7
• 申請(qǐng)日: 2016-12-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108264540A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王衛(wèi)國(guó);章方良;劉文玉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇金斯瑞生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K7/23
• 分類號(hào): C07K7/23;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 夏平;李曉峰

本發(fā)明公開(kāi)了一種西曲瑞克的制備方法，包括以下步驟：(1)采用樹(shù)脂為載體，與西曲瑞克C端氨基酸酯化，制備氨基酸?樹(shù)脂復(fù)合物；(2)采用Fmoc策略固相多肽合成方法，制備保護(hù)的西曲瑞克?樹(shù)脂復(fù)合物；(3)TFA脫除側(cè)鏈保護(hù)基，制備脫保護(hù)的西曲瑞克?樹(shù)脂復(fù)合物；(4)氨解法得到西曲瑞克粗品；(5)采用高效液相法純化粗品，得到西曲瑞克精品。本發(fā)明適合簡(jiǎn)便、高效制備西曲瑞克。本發(fā)明解決了現(xiàn)有方法副反應(yīng)多、產(chǎn)率低、成本高的問(wèn)題。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬多肽化學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種西曲瑞克的固相制備方法。

背景技術(shù)：

西曲瑞克是德國(guó)Asta Medica公司研制的一種LHRH拮抗劑，能控制卵巢的刺激作用，預(yù)防不成熟卵泡過(guò)早排出，幫助受孕。大量研究表明，西曲瑞克對(duì)卵巢癌、前列腺癌、子宮纖維瘤、子宮內(nèi)膜異位等疾病有較好的療效，而且對(duì)良性前列腺肥大和卵巢過(guò)度刺激綜合征有預(yù)防和改善作用。西曲瑞克的結(jié)構(gòu)為十肽:AC-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2；其結(jié)構(gòu)式如下式所示：

西曲瑞克的制備采用化學(xué)法合成。

專利CN 101863960 B采用王樹(shù)脂和Boc策略合成西曲瑞克，存在問(wèn)題是：每一步采用TFA脫Boc均會(huì)使部分多肽被切除，導(dǎo)致產(chǎn)率下降。Pd/H2脫除側(cè)鏈保護(hù)基需要特殊裝置，增加危險(xiǎn)性。專利CN 101284863 B使用側(cè)鏈無(wú)保護(hù)的Cit，會(huì)導(dǎo)致雜質(zhì)[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克的產(chǎn)生。專利CN 104086632 A采用側(cè)鏈用Dde保護(hù)的鳥(niǎo)氨酸為原料，避免了[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克的產(chǎn)生，但是由鳥(niǎo)氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)镃it則需要繁瑣的操作，增加生產(chǎn)成本。

專利CN 104610433 A采用Ac-D-2-Nal-OH為原料，省略了乙酰化操作，避免了雜質(zhì)[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克的產(chǎn)生。但是采用切割試劑脫除側(cè)鏈保護(hù)基的同時(shí)，多肽也將從樹(shù)脂上被切割到溶液中，保護(hù)基及切割試劑產(chǎn)生的雜質(zhì)將提高純化的難度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種簡(jiǎn)便、高效的西曲瑞克制備方法，解決目前西曲瑞克制備繁瑣、合成及酸解時(shí)副反應(yīng)多的問(wèn)題。

本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種西曲瑞克的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備Fmoc-D-Ala-樹(shù)脂復(fù)合物：用二甲基甲酰胺溶解C端氨基酸Fmoc-D-Ala-OH及酯化試劑后，加入到用二甲基甲酰胺浸泡處理后的樹(shù)脂中進(jìn)行酯化反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，用二甲基甲酰胺洗滌樹(shù)脂，得到Fmoc-D-Ala-樹(shù)脂復(fù)合物；

(2)制備保護(hù)的西曲瑞克-樹(shù)脂復(fù)合物：向步驟(1)得到的Fmoc-D-Ala-樹(shù)脂復(fù)合物中加入Fmoc脫保護(hù)試劑進(jìn)行Fmoc脫保護(hù)反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后過(guò)濾并用二甲基甲酰胺洗滌樹(shù)脂，然后向脫保護(hù)的Fmoc-D-Ala-樹(shù)脂復(fù)合物中加入西曲瑞克的C端第二個(gè)氨基酸和縮合試劑進(jìn)行縮合反應(yīng)，縮合反應(yīng)結(jié)束后用二甲基甲酰胺洗滌樹(shù)脂；按照西曲瑞克從C端到N端的順序，更換氨基酸，重復(fù)Fmoc脫保護(hù)反應(yīng)和縮合反應(yīng)，得到保護(hù)的西曲瑞克-樹(shù)脂復(fù)合物；

(3)制備脫保護(hù)的西曲瑞克-樹(shù)脂復(fù)合物：向保護(hù)的西曲瑞克-樹(shù)脂復(fù)合物中加入切割試劑，脫除多肽側(cè)鏈保護(hù)基；反應(yīng)結(jié)束后過(guò)濾，并加入洗滌溶劑洗滌樹(shù)脂，過(guò)濾，得到脫保護(hù)的西曲瑞克-樹(shù)脂復(fù)合物；

(4)制備西曲瑞克粗品：向脫保護(hù)的西曲瑞克-樹(shù)脂復(fù)合物中加入氨解試劑，反應(yīng)結(jié)束后，過(guò)濾，收集濾液，旋蒸后得到西曲瑞克粗品；

(5)制備西曲瑞克精品：采用反相高效液相色譜分離純化西曲瑞克粗品，得到西曲瑞克精品。

步驟(1)中所述的樹(shù)脂為Merrifield樹(shù)脂、羥甲基樹(shù)脂、4-羥甲基苯乙酰胺甲基樹(shù)脂或4-羥甲基苯甲酰胺甲基樹(shù)脂。