[發(fā)明專利]一種誘導肌腱組織再生的生物活性支架及其制備方法和用途有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201611263819.2 | 申請日： | 2016-12-28 |
| 公開（公告）號： | CN108245708B | 公開（公告）日： | 2021-04-23 |
| 發(fā)明（設計）人： | 秦廷武;寧良菊;張亞靖;崔靜;姚璇;羅靜聰 | 申請（專利權(quán)）人： | 四川大學華西醫(yī)院 |
| 主分類號： | A61L27/36 | 分類號： | A61L27/36;A61L27/50;A61L27/54;A61L27/58 |
| 代理公司： | 成都高遠知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 51222 | 代理人： | 李高峽;張娟 |
| 地址： | 610047 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 誘導 肌腱 組織 再生 生物 活性 支架 及其 制備 方法 用途 | ||
1.一種制備誘導肌腱組織再生的生物活性支架的方法，其特征在于：包括如下步驟：
（1）取新鮮肌腱，脫細胞處理，得脫細胞肌腱壓片或切片支架；
（2）在上述支架上復合細胞外基質(zhì)，即可；
步驟（2）中，復合細胞外基質(zhì)的方法是：
①取肌腱細胞或者干細胞，接種于步驟（1）的脫細胞肌腱壓片或切片支架上培養(yǎng)；
②待細胞生長至匯合度為100%的致密細胞片層，進行脫細胞處理；
步驟①中，所述干細胞是骨髓基質(zhì)干細胞、脂肪干細胞、肌腱干細胞；
步驟②中，待細胞達到90%融合時，加入50μΜ Vc繼續(xù)培養(yǎng)6-8 d至融合度為100%的致密細胞片層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）所述脫細胞肌腱壓片支架的制備方法如下：
1）取新鮮肌腱，清洗；
2）將肌腱沿厚度方向進行壓縮，壓縮率為60～90％；
3）對步驟2）壓縮后的肌腱進行反復凍融；所述反復凍融是將步驟2）壓縮后的肌腱置于液氮中1～3min，25～37℃放置3～10min，重復操作4～6次；
4）將步驟3）處理后的肌腱用核酸酶處理，清洗，即可；
其中，核酸酶處理的方法為：取步驟3）處理后的肌腱，置于DNase濃度為120～180IU/ml和RNase濃度為80～120μg/ml的核酸酶溶液中，室溫或37℃恒溫處理6～24h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）所述脫細胞肌腱切片支架的制備方法如下：
1）取新鮮肌腱，清洗；
2）將肌腱進行反復凍融；所述反復凍融是將步驟1）清洗后的肌腱置于液氮中1～3min，25～37℃放置3～10min，重復操作4～6次；
3）對步驟2）凍融處理后的肌腱沿長度方向進行冰凍切片，切片厚度為300～900μm；
4）將步驟3）獲得的肌腱切片用核酸酶處理，清洗，即可；
其中，核酸酶處理的方法為：取步驟3）得到的肌腱切片，置于DNase濃度為120～180IU/ml和RNase濃度為80～120μg/ml的核酸酶溶液中，室溫或37℃恒溫處理6～24h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟②中，所述脫細胞處理是先用含20mM氨水的0.5% Triton X-100 37℃處理 15min，再用100 U/ml DNA酶37℃處理2h。
5.權(quán)利要求1~4任意一項所述方法制備的誘導肌腱組織再生的生物活性支架。
6.權(quán)利要求5所述的誘導肌腱組織再生的生物活性支架在制備治療軟組織缺損修復材料中的用途。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于：所述軟組織缺損修復材料是肌腱組織或韌帶組織缺損修復材料。
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