[發明專利]一種測定大鼠姜黃素血漿濃度的UHPLC?MS/MS分析方法

在審

• 申請號: 201611257300.3
• 申請日: 2016-12-30
• 公開（公告）號: CN106841422A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 溫鼎聲;姜福林;陳江英;鐘國平;黃民
• 申請（專利權）人: 廣州中大南沙科技創新產業園有限公司;中山大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/88
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司44102
• 代理人: 陳衛

1.一種測定大鼠姜黃素血漿濃度的UHPLC-MS/MS分析方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）配制姜黃素標準溶液、內標替硝唑標準溶液，建立標準曲線；

（2）待測血漿中加入內標后，進行前處理，進行LC-MS/MS分析，利用標準曲線計算出待測血漿中姜黃素的濃度。

2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.建立標準曲線

S11.配制標準溶液：

精密稱取姜黃素對照品，溶解于乙腈溶液中震蕩搖勻，得1mg/mL的標準儲備液，再用甲醇/水=1/1稀釋液溶液梯度稀釋，得一系列濃度的姜黃素標準溶液；

精密稱取替硝唑標準品，溶解于90%甲醇水溶液中震蕩搖勻，得1mg/mL的母液，再用90%甲醇水溶液稀釋成0.2 μg/mL標準溶液；

S12.建立標準曲線

分別取一系列濃度的姜黃素標準溶液，分別加入空白血漿，震蕩后，加入內標替硝唑標準溶液，進行樣品前處理后，進行UHPLC-MS/MS分析，以不同濃度的姜黃素的峰面積與內標替硝唑的峰面積之比Y 為縱坐標，以姜黃素的血藥濃度C為橫坐標進行直線回歸，建立標準曲線；

S2.樣品檢測：待測樣品前處理后，進行UHPLC-MS/MS分析。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述前處理的方法為：樣品加入內標后，旋渦混勻，加入3～5倍體積的乙酸乙酯，旋渦振蕩，靜置2～5min后，離心取有機層，室溫真空揮干，加入乙腈-醋酸銨溶液溶解，離心取上清，即為供試品溶液，用于UHPLC-MS/MS進樣分析。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述樣品和內標的體積比為8～12：1。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述旋渦混勻的時間為5～20s；所述旋渦振蕩的時間為30～90s。

6. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述乙腈-醋酸銨溶液為乙腈和10 mM醋酸銨的混合溶液，兩者的體積比為8：2。

7.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟S12和步驟S2所述UHPLC-MS/MS分析的液質條件如下：

色譜條件：正離子監測：流動相為乙腈：水的體積比=80：20，流速為300μL/min，柱溫為室溫；分析時間為2.0 min；

質譜條件：離子源為電噴霧電離源；電噴霧電壓正離子模式為4500 V；加熱毛細管溫度為350℃；鞘氣（N₂）壓力為30 psi，輔氣壓力為25 psi，碰撞氣壓力為1.5 mTorr；掃描峰寬為0.5 Th；掃描時間為0.3 s；掃描方式為選擇反應監測，定量監測的母離子、子離子。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述流動相中含有10mM醋酸銨。

9.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟S12所述震蕩的時間為10～30s。