[發(fā)明專(zhuān)利]紫扇貝、海灣扇貝與雜交后代母本來(lái)源的鑒定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611253679.0
• 申請(qǐng)日: 2016-12-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106701948B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王春德;劉鳳巧;劉博;劉桂龍;趙玉明;馬斌;陳銀;徐冬雪
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6888
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6888
• 代理公司: 青島海昊知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 張中南

本發(fā)明涉及一種紫扇貝、海灣扇貝與雜交后代母本來(lái)源的鑒定方法，是基于線(xiàn)粒體DNA序列的差異性而設(shè)計(jì)的標(biāo)記引物mtDNA?Z，分別由左端引物序列mtDNA?Z?F：5’?TATGAGGTGTCCCCCAAGTC?3’和右端引物序列mtDNA?Z?R:5’?ACTGGCAGACAAACAAATCGT?3’組成，以提取的紫扇貝、海灣扇貝與雜交扇貝的DNA為模板，并利用該引物對(duì)其進(jìn)行PCR擴(kuò)增，若在近460bp處有PCR特異性條帶出現(xiàn)，則確定母本線(xiàn)粒體基因來(lái)源為紫扇貝，若在近460bp處無(wú)PCR特異性條帶出現(xiàn)，則確定其母本線(xiàn)粒體基因來(lái)源為海灣扇貝，本發(fā)明排除了核基因組DNA的影響，無(wú)需單獨(dú)提取線(xiàn)粒體DNA來(lái)進(jìn)行鑒定，因此可以快速高效的鑒定出紫扇貝、海灣扇貝與雜交后代的親本來(lái)源，方法簡(jiǎn)便，周期時(shí)間短，可大批量進(jìn)行，為確保育種進(jìn)程的順利進(jìn)行和確證后代的譜系提供技術(shù)支持和保障。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于扇貝雜交育種的后裔鑒定技術(shù)，尤其是涉及紫扇貝、海灣扇貝與雜交后代母本來(lái)源的鑒定方法。

背景技術(shù)

海灣扇貝(Argopecten irradians)自1982年從美國(guó)引進(jìn)以來(lái),產(chǎn)量逐年增加，已成為中國(guó)最重要的養(yǎng)殖貝類(lèi)之一，但是近年來(lái)出現(xiàn)的種質(zhì)退化問(wèn)題成為制約中國(guó)扇貝養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的嚴(yán)重障礙。

紫扇貝(Argopecten purpuratus)是南美洲太平洋海岸的優(yōu)良經(jīng)濟(jì)貝類(lèi)，大小中等，廣泛養(yǎng)殖于智利和秘魯，并使智利成為僅次于中國(guó)的扇貝養(yǎng)殖大國(guó)。為了改善海灣扇貝的種質(zhì)，提高扇貝養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)產(chǎn)量，王春德等于2008年從秘魯引進(jìn)紫扇貝并與海灣扇貝成功雜交，培育出生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)極其顯著的兩種雜交子一代，即紫海雜交扇貝(紫扇貝卵子×海灣扇貝精子)和海紫雜交扇貝(海灣扇貝卵子×紫扇貝精子)(王春德等，2009；Wang et al,2011)。但紫扇貝和海灣扇貝均為雌雄同體的動(dòng)物，在繁育時(shí)兩種扇貝均同時(shí)排放精子和卵子，在育種實(shí)踐中存在著精子或卵子污染的問(wèn)題，為確保育種進(jìn)程的順利進(jìn)行并確證后代的譜系，經(jīng)常需要確定某一后代是否為真正的雜交后代及其父母本來(lái)源，因此需要建立一種方法來(lái)快速鑒定其親本來(lái)源尤其是母本來(lái)源。

利用來(lái)自核基因組的分子標(biāo)記(如微衛(wèi)星標(biāo)記)鑒定方法雖然也可以用來(lái)鑒定雜交后代是否為真正的雜交種，但是無(wú)法辨別其父母本來(lái)源，導(dǎo)致雜交后代譜系混亂、難以對(duì)優(yōu)良的品系進(jìn)行篩選等問(wèn)題，而且在雜交試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，用作雜交的母體不同，其雜交子一代性狀的表現(xiàn)也不同，有的甚至完全表現(xiàn)為母體的性狀，因此快速鑒定雜交扇貝的母本來(lái)源是非常必要的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種紫扇貝、海灣扇貝與雜交后代母本來(lái)源的鑒定方法，該方法是基于線(xiàn)粒體DNA序列的差異性而設(shè)計(jì)的標(biāo)記引物，并利用該標(biāo)記引物序列鑒定紫扇貝、海灣扇貝與雜交后代母本的來(lái)源，以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。

研究已發(fā)現(xiàn)，線(xiàn)粒體基因組嚴(yán)格遵循母系遺傳規(guī)律，且缺少基因重組，雜交后代的線(xiàn)粒體必定來(lái)自其母本，因此通過(guò)鑒定其線(xiàn)粒體DNA的來(lái)源就可以確定雜交種的母本來(lái)源。本發(fā)明根據(jù)海灣扇貝和紫扇貝線(xiàn)粒體基因組差異性特點(diǎn)，專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物，以便通過(guò)PCR方法鑒定雜交后代線(xiàn)粒體基因的類(lèi)型，從而實(shí)現(xiàn)快速鑒定雜交扇貝的母本來(lái)源。

本發(fā)明基于以下構(gòu)思：已有研究表明，扇貝的線(xiàn)粒體基因組遵循嚴(yán)格的母系遺傳，即后代的線(xiàn)粒體基因與其母本線(xiàn)粒體基因型完全相同，而與父本的線(xiàn)粒體基因型無(wú)關(guān)；具體到海灣扇貝和紫扇貝均為Argopecten屬的近緣種，雖然其線(xiàn)粒體基因組序列相似性高達(dá)82.34％，但仍可以根據(jù)兩者線(xiàn)粒體基因序列的少許差異設(shè)計(jì)出特異的引物，從而區(qū)分雜交后代線(xiàn)粒體基因的來(lái)源，為育種工作的順利進(jìn)行提供技術(shù)支持或保障。

本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：紫扇貝、海灣扇貝與雜交后代母本來(lái)源的鑒定方法，所用標(biāo)記引物為mtDNA-Z，分別由左端引物序列mtDNA-Z-F：5’-TATGAGGTGTCCCCCAAGTC-3’和右端引物序列mtDNA-Z-R：5’-ACTGGCAGACAAACAAATCGT-3’組成。