[發(fā)明專利]紫扇貝、海灣扇貝與雜交后代母本來源的鑒定方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201611253679.0 | 申請(qǐng)日： | 2016-12-30 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN106701948B | 公開（公告）日： | 2020-05-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王春德;劉鳳巧;劉博;劉桂龍;趙玉明;馬斌;陳銀;徐冬雪 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 青島農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6888 | 分類號(hào)： | C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 青島海昊知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201 | 代理人： | 張中南 |
| 地址： | 266109 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 扇貝 海灣 雜交 后代 母本 來源 鑒定 方法 | ||
1.一種紫扇貝、海灣扇貝及其雜交后代母本來源的鑒定方法，其特征是所用標(biāo)記引物為mtDNA-Z，其由左端引物序列mtDNA-Z-F和右端引物序列mtDNA-Z-R組成，其中左端引物序列mtDNA-Z-F為5’-TATGAGGTGTCCCCCAAGTC-3’，右端引物序列mtDNA-Z-R為5’-ACTGGCAGACAAACAAATCGT-3’；
所述的紫扇貝、海灣扇貝及其雜交后代母本來源的鑒定方法的具體步驟如下：
（1）取待鑒定的紫扇貝、海灣扇貝與海紫雜交扇貝、紫海雜交扇貝的閉殼肌，直接用常規(guī)的方法提取全基因組DNA，用TE緩沖液稀釋至終濃度100 ng/μL保存在-20℃?zhèn)溆茫黄渲兴龊Ｗ想s交扇貝為海灣扇貝卵子×紫扇貝精子的后代;所述紫海雜交扇貝為紫扇貝卵子×海灣扇貝精子的后代；
（2）分別以提取的紫扇貝、海灣扇貝、上述雜交扇貝的DNA為模板，用上述引物mtDNA-Z對(duì)其進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系為10μL，包括0.25 U Taq DNA 酶， 含1.5mM MgCl2的1×PCRbuffer， 0.2mM dNTP mix， 左右端引物各1μM， 50ngDNA模板；反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性3min， 94℃ 1min， 56℃ 1min， 72℃ 1min， 30個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min；PCR 產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，凝膠成像系統(tǒng)照相觀察電泳結(jié)果；如果在近460bp處有PCR特異性條帶出現(xiàn)，則確定母本來源為紫扇貝，如果在近460bp處沒有PCR特異性條帶出現(xiàn)，則確定其母本來源為海灣扇貝。
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