[發明專利]用于分析重復序列的mPCR方法在審
| 申請號: | 201611252251.4 | 申請日: | 2011-10-28 |
| 公開(公告)號: | CN106868107A | 公開(公告)日: | 2017-06-20 |
| 發明(設計)人: | G.J.拉薩姆;L.陳;A.哈德;S.薩;R.曹 | 申請(專利權)人: | 奧斯瑞根公司 |
| 主分類號: | C12Q1/68 | 分類號: | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司: | 北京市柳沈律師事務所11105 | 代理人: | 張文輝 |
| 地址: | 美國得*** | 國省代碼: | 暫無信息 |
| 權利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 用于 分析 重復 序列 mpcr 方法 | ||
1.一種表征DNA樣品中FMR基因座的方法,包括下列步驟:
a)使所述樣品的第一部分與甲基化敏感性DNA酶接觸;
b)將GC參照標準品添加至所述樣品,其中所述參照標準品具有至少75%GC豐度;
c)將所述樣品的所述第一部分和第二部分進行DNA擴增反應,所述第一部分和第二部分各自含有所述GC參照標準品,其中用不同標記物標記每個部分中擴增的DNA;并
d)分析來自所述樣品的所述第一和所述第二部分的擴增的DNA,由此表征所述FMR基因座的甲基化狀態。
2.權利要求1的方法,其中步驟(d)包括毛細管電泳(CE)。
3.權利要求2的方法,其中所述GC參照標準品缺乏所述甲基化敏感性DNA酶的識別位點。
4.權利要求2的方法,其中在單次CE運行中分析來自所述第一和所述第二部分的所述擴增的DNA。
5.權利要求2的方法,其中所述GC參照標準品具有與天然存在的FMR等位基因不重疊的CE遷移時間。
6.權利要求2的方法,其中所述GC參照標準品具有小于約20、約24至27、或大于約32個CGG重復的相對保留時間。
7.權利要求2的方法,其中所述GC參照標準品具有小于約3個CGG重復的相對保留時間。
8.權利要求2的方法,其中所述GC參照標準品具有約175至約225個CGG重復的相對保留時間。
9.權利要求1的方法,其中所述甲基化敏感性DNA酶選自Hpa II、Eag I、或Nru I。
10.權利要求1的方法,其中所述擴增反應能夠擴增至少200個CGG重復。
11.權利要求10的方法,其中所述擴增反應包含具有大于1的GC/AT比率的dNTP混合物。
12.權利要求11的方法,其中所述GC/AT比率是約2.5至約10。
13.權利要求1的方法,其中所述FMR基因座是FMR1基因座。
14.權利要求1的方法,其中在使所述第一部分與所述DNA酶接觸后將所述GC參照標準品添加至所述樣品。
15.權利要求1的方法,其中在使所述第一部分與所述DNA酶接觸前將所述GC參照標準品添加至所述樣品。
16.權利要求1的方法,其進一步包括使所述樣品的所述第二部分與對照酶接觸。
17.權利要求16的方法,其中所述對照酶選自EcoRI和Sau3A1。
18.權利要求16的方法,其中在使所述第一部分與所述DNA酶接觸前將所述GC參照標準品添加至所述樣品,且所述對照酶選自HindIII-HF、EcoRI、DpnI、和NaeI。
19.權利要求1的方法,其進一步包括在使所述樣品的所述第一部分與所述甲基化敏感性DNA酶接觸前將消化對照添加至所述樣品。
20.權利要求19的方法,其中所述消化對照具有小于約3個CGG重復的相對保留時間,所述GC參照標準品具有小于約3個CGG重復的相對保留時間,且所述消化對照擴增產物和所述參照標準品的相對保留時間相差約4個CGG重復或更多。
21.一種分析人DNA樣品的方法,包括下列步驟:
a)使所述樣品的第一部分與甲基化敏感性DNA酶接觸;
b)將GC參照標準品添加至所述樣品,其中所述參照標準品具有至少75%GC豐度;
c)將所述樣品的所述第一部分和第二部分進行DNA擴增反應,其中用不同標記物標記每個部分中的擴增DNA;并
d)分析來自所述樣品的所述第一和所述第二部分的擴增DNA,由此檢測與脆性X綜合征、脆性X關聯震顫共濟失調綜合征、和/或脆性X關聯原發性卵巢功能不全有關的基因型。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息,商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于奧斯瑞根公司,未經奧斯瑞根公司許可,擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作,請聯系【客服】
本文鏈接:http://www.szxzyx.cn/pat/books/201611252251.4/1.html,轉載請聲明來源鉆瓜專利網。





