[發(fā)明專利]一種特異性的檢測弓形蟲的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611251808.2
• 申請日: 2016-12-30
• 公開（公告）號: CN108265070B
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱傳剛;王釗哲;許瑞;林矯矯;陳兆國;洪煬;陸珂;李浩;吳思敏;李嘉靜;江嘉欣
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/62;C07K19/00;C07K1/22
• 代理公司: 上海碩力知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31251
• 代理人: 郭桂峰

1.重組弓形蟲SAG1和SAG2融合蛋白在制備利用ELISA法檢測弓形蟲的制劑中的應(yīng)用，所述融合蛋白的制備包括以下步驟：

1)、重組弓形蟲SAG1和SAG2融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO:1所示；

2)、將SEQ ID NO:1所示基因與PET-28a(+)載體連接后，轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞，挑取完整單個菌落于LB液體培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)過夜；之后進行菌液PCR、雙酶切和測序鑒定；

3)、菌液振蕩培養(yǎng)至OD值為0.6—0.8時，加入IPTG誘導(dǎo)，誘導(dǎo)后1h收集菌液，離心，加入1×PBS進行SDS-PAGE電泳；

4)、將誘導(dǎo)后的菌液離心，收集沉淀，用1×PBS重懸，反復(fù)凍融3次后，冰浴超聲破碎后離心，收集上清，沉淀用尿素重懸，之后進行SDS-PAGE電泳，對蛋白可溶性進行分析；使用His親和層析柱對表達(dá)的重組蛋白進行純化，收集各段洗脫液樣品；

所述檢測方法為將純化后的重組蛋白作為抗原，并通過ELISA法對相應(yīng)血清中的抗體進行檢測，其區(qū)分陰性或陽性血清。

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述LB培養(yǎng)基含有50μg/mL Kana。

3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述IPTG終濃度為1mmol/L。

4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述離心轉(zhuǎn)速為12000×g。

5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述尿素為8mol/L。