[發(fā)明專利]一種抗鏈球菌溶血素O快速診斷試劑盒及其使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611248706.5
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN106855571A
• 公開（公告）日: 2017-06-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳立國;鄒偉權(quán);張亞麗;李慶祥;母潤紅;王濤;蘇焱
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州華弘生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/536
• 分類號: G01N33/536;G01N21/31
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務(wù)所(普通合伙)11470
• 代理人: 劉曄

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)生物類免疫檢測試劑領(lǐng)域，具體涉及一種抗鏈球菌溶血素O快速診斷試劑盒及其使用方法。

背景技術(shù)

鏈球菌溶血素O是A群溶血性鏈球菌的代謝產(chǎn)物，它是一種具有溶血活性的蛋白質(zhì)，并且是一種強(qiáng)抗原物質(zhì)。人感染溶血性鏈球菌2～3周后，即可產(chǎn)生抗鏈球菌溶血素O(ASO)。此種抗體的顯著遞增與急性風(fēng)濕熱、急性腎小球腎炎、風(fēng)濕性心臟病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或急性腎臟病變等密切相關(guān)，持續(xù)存在或水平下降則提示疾病為非活動期或恢復(fù)期，臨床動態(tài)監(jiān)測ASO具有重要意義。

目前常用的檢測ASO的方法有：1)點免疫結(jié)合法、2)溶血抑制法、3)膠乳凝集法、4)酶聯(lián)免疫法、5)膠乳增強(qiáng)免疫比濁法。

其中，點免疫結(jié)合法以硝酸纖維素薄膜為固相載體，把鏈球菌溶血素O抗原點在硝酸纖維素薄膜上，未點抗原的部分用吐溫20封閉，固定在硝酸纖維素薄膜上的抗原與被檢測血清中的抗鏈球菌溶血素O抗體反應(yīng)，然后再與過氧化物酶標(biāo)記的馬抗人免疫球蛋白IgG反應(yīng)，過氧化物酶的存在與否則用含有鹽酸聯(lián)苯胺和過氧化氫的底物檢測，陽性反應(yīng)點上由于形成有色的沉淀而把硝酸纖維素薄膜染成藍(lán)褐色。可通過目測判斷反應(yīng)結(jié)果，但該方法只能定性不能進(jìn)行定量。

溶血抑制法依據(jù)還原劑助溶血素O能溶解紅細(xì)胞的特性，通過觀察ASO中和溶血素O的溶血作用，定量檢測ASO，該方法較敏感，但操作繁瑣，試驗影響因素較多，結(jié)果重復(fù)性欠佳。

膠乳凝集法依據(jù)被測血清中若有高滴度的ASO，在與ASO膠乳反應(yīng)時會引起后者凝集，如預(yù)先用25結(jié)合單位/ml溶血素“O”中和后，不出現(xiàn)凝集者說明血清中ASO＜250單位，為陰性，仍出現(xiàn)凝集者說明血清中的ASO＞250單位，為陽性，但其靈敏度低，特異性差，假陽性率高，已遠(yuǎn)不能滿足臨床診斷、治療及預(yù)后的需要。

酶聯(lián)免疫法依據(jù)抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物顯色，用酶標(biāo)儀測定吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中抗鏈球菌溶血素O抗體的含量，但該方法重復(fù)性較差，精密度較低，且容易受到酶穩(wěn)定性的影響。

膠乳增強(qiáng)免疫比濁法可定量測定血清中ASO含量，是當(dāng)前國內(nèi)外檢測ASO常用的手段，該方法以大小均一且表面包被有鏈球菌溶血素O的聚苯乙烯乳膠顆粒懸液為檢測試劑，當(dāng)含有ASO的樣品與該試劑混合時，發(fā)生明顯的抗原-抗體凝集反應(yīng)，通過測定570nm處吸光度值的變化，計算出樣品中ASO抗體的含量。如公開號為CN 104483492A的中國專利申請公開了一種抗鏈球菌溶血素O抗體的檢測試劑盒，該試劑盒首先利用化學(xué)交聯(lián)法將惰性蛋白(牛血清白蛋白)與鏈球菌溶血素O結(jié)合，制得穩(wěn)定性好的組合蛋白，再利用化學(xué)交聯(lián)法將組合蛋白與膠乳顆粒進(jìn)行交聯(lián)，制成鏈球菌溶血素O-牛血清白蛋白-膠乳顆粒復(fù)合物，通過檢測抗原抗體之間的免疫反應(yīng)形成的濁度，定量檢測ASO的含量。采用膠乳增強(qiáng)免疫比濁法對ASO進(jìn)行檢測，具有重復(fù)性好，自動化程度高，操作簡便快速，但其檢測的靈敏度和檢測特異性有待提高。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種抗鏈球菌溶血素O快速診斷試劑盒，采用該試劑盒進(jìn)行抗鏈球菌溶血素O檢測具有較高的靈敏度和特異性，且操作簡單，操作流程短。

本發(fā)明另外一個目的在于提供一種所述抗鏈球菌溶血素O快速診斷試劑盒的使用方法。

本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

本發(fā)明提供了一種抗鏈球菌溶血素O快速診斷試劑盒，其包含樣本處理液、反應(yīng)緩沖液、膠體金標(biāo)記穩(wěn)定液、標(biāo)準(zhǔn)品、清洗液。

其中，所述的膠體金標(biāo)記穩(wěn)定液為含2～8％(w/v)三羥甲基甲胺基乙磺酸、0.02～0.1％(w/v)疊氮化鈉、0.1～0.2％(w/v)吐溫-20、2～6％(w/v)海藻酸鈉、1～2％(w/v)甘氨酸的膠體金標(biāo)記鏈球菌溶血素O溶液。

進(jìn)一步地，所述的膠體金標(biāo)記鏈球菌溶血素O溶液的制備包括以下步驟：

(1)膠體金的制備：

①取100mL質(zhì)量濃度為0.01％的四氯金酸水溶液與1mL聚乙二醇4000混合，加熱至沸騰，保持沸騰3min，在1000r/min攪拌速度下，迅速加入2mL還原劑溶液，在攪拌下繼續(xù)加熱，直至溶液變成成橘紅色為止，冷卻，即得膠體金溶液；