[發(fā)明專利]一種用于鑒定長(zhǎng)江江豚個(gè)體間親緣關(guān)系的引物、試劑盒及鑒別方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611247089.7
• 申請(qǐng)日: 2016-12-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106591462B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐永凱;徐跑;俞菊華;李建林;劉凱;李紅霞;于凡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 黃欣

本發(fā)明提供了一種用于鑒定長(zhǎng)江江豚個(gè)體間半同胞、全同胞以及父母本親緣關(guān)系的引物、試劑盒及鑒別方法，所述引物包括有用于擴(kuò)增的20對(duì)微衛(wèi)星引物。運(yùn)用本發(fā)明的鑒別方法，可以快速準(zhǔn)確地對(duì)長(zhǎng)江江豚個(gè)體間進(jìn)行半同胞、全同胞以及父母本親緣關(guān)系鑒定，在長(zhǎng)江江豚的種質(zhì)資源保護(hù)中具有廣泛的用途。而以前的微衛(wèi)星研究多用于長(zhǎng)江江豚種群的遺傳結(jié)構(gòu)以及父權(quán)的鑒定，未涉及到個(gè)體間半同胞、全同胞以及父母本的親緣關(guān)系鑒定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于鑒定長(zhǎng)江江豚個(gè)體間半同胞、全同胞以及父母本親緣關(guān)系的引物、試劑盒及鑒別方法。

背景技術(shù)

長(zhǎng)江江豚(Neophocaena phocaenoides asiaeorientalis)是一種小型齒鯨，被列為國(guó)家二級(jí)保護(hù)動(dòng)物，主要分布于長(zhǎng)江中下游干流、洞庭湖和鄱陽(yáng)湖及其主要支流，是一個(gè)相對(duì)獨(dú)立的淡水亞種。2006年底開(kāi)展的長(zhǎng)江豚類國(guó)際聯(lián)合考察結(jié)果表明，當(dāng)時(shí)其數(shù)量約為1800頭，且以每年至少5％的速度持續(xù)下降。由于長(zhǎng)江生態(tài)環(huán)境在較短的時(shí)期內(nèi)不大可能有明顯的好轉(zhuǎn)，因此開(kāi)展遷地保護(hù)以及加強(qiáng)人工繁育被認(rèn)為是避免長(zhǎng)江江豚滅絕最有希望的兩項(xiàng)保護(hù)措施，目前已在湖北石首天鵝洲，安徽銅陵等地建立了自然保護(hù)區(qū)，顯示出了較好的保護(hù)效果。

在遷地保護(hù)區(qū)，由于種群過(guò)小，極可能導(dǎo)致近交衰退。為了防止近親交配，需要對(duì)種群中的個(gè)體進(jìn)行親緣關(guān)系鑒定，以建立可靠的遺傳譜系用于指導(dǎo)科學(xué)的繁殖管理，以及不同保護(hù)區(qū)間長(zhǎng)江江豚個(gè)體的交換。由于長(zhǎng)江江豚生活在水中，很難通過(guò)觀察以及外部特征確定群體間的親緣關(guān)系，因此迫切需要一種新的，可性度高的技術(shù)來(lái)解決江豚繁殖群體的親子鑒定問(wèn)題。近年來(lái)，微衛(wèi)星作為一種新型的分子標(biāo)記，它是以個(gè)體間遺傳物質(zhì)為基礎(chǔ)的遺傳標(biāo)記，廣泛應(yīng)用于種群動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)分析，個(gè)體間親緣關(guān)系鑒定。與其它分子標(biāo)記相比，微衛(wèi)星分子標(biāo)記具有數(shù)量大、分布廣且均勻、多態(tài)信息含量高的特點(diǎn)，在法醫(yī)鑒定中得以了廣泛應(yīng)用，易適用于長(zhǎng)江江豚的個(gè)體間半同胞、全同胞以及父母本親緣關(guān)系鑒定。

發(fā)明內(nèi)容

解決的技術(shù)問(wèn)題：本發(fā)明的目的是提供一種用于鑒定長(zhǎng)江江豚個(gè)體間半同胞、全同胞以及父母本親緣關(guān)系的引物、試劑盒及鑒別方法，有助于快速、準(zhǔn)確對(duì)長(zhǎng)江江豚個(gè)體間進(jìn)行半同胞、全同胞間以及父母本的親緣關(guān)系鑒定，在長(zhǎng)江江豚的種質(zhì)資源保護(hù)中具有廣泛的用途。

技術(shù)方案：一種用于鑒定長(zhǎng)江江豚個(gè)體間親緣關(guān)系的引物，包括有用于擴(kuò)增的20對(duì)微衛(wèi)星引物，其序列如下：JTSSR1 SEQ ID NO.1～2、JTSSR2 SEQ ID NO.3～4、JTSSR3SEQ ID NO.5～6、JTSSR4 SEQ ID NO.7～8、JTSSR5 SEQ ID NO.9～10、JTSSR6 SEQ IDNO.11～12、JTSSR7 SEQ ID NO.13～14、JTSSR8 SEQ ID NO.15～16、JTSSR9 SEQ ID NO.17～18、JTSSR10 SEQ ID NO.19～20、JTSSR11 SEQ ID NO.21～22、JTSSR12 SEQ ID NO.23～24、JTSSR13 SEQ ID NO.25～26、JTSSR14 SEQ ID NO.27～28、JTSSR15 SEQ ID NO.29～30、JTSSR16 SEQ ID NO.31～32、JTSSR17 SEQ ID NO.33～34、JTSSR18 SEQ ID NO.35～36、JTSSR19 SEQ ID NO.37～38、JTSSR20 SEQ ID NO.39～40。

所述的每對(duì)引物對(duì)中至少有一個(gè)引物的5’端進(jìn)行熒光染料標(biāo)記。

每對(duì)引物進(jìn)行標(biāo)記時(shí)是采用FAM和HEX中的任意一種進(jìn)行染色。

根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，還提供了包含有上述引物組的檢測(cè)試劑盒。

所述的試劑盒由如下組成：DNA模板，10×反應(yīng)緩沖液，Mg²⁺，dNTP，上下游引物，Taq酶，滅菌雙蒸餾水。