[發明專利]一種用于鑒定長江江豚個體間親緣關系的引物、試劑盒及鑒別方法

有效

• 申請號: 201611247089.7
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN106591462B
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: 唐永凱;徐跑;俞菊華;李建林;劉凱;李紅霞;于凡
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院淡水漁業研究中心
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 黃欣

1.一種用于鑒定長江江豚個體間親緣關系的引物組合，其特征在于：包括有用于擴增的20對微衛星引物，其序列如下：JTSSR1 SEQ ID NO.1～2、JTSSR2 SEQ ID NO.3～4、JTSSR3 SEQ ID NO.5～6、JTSSR4 SEQ ID NO.7～8、JTSSR5 SEQ ID NO.9～10、JTSSR6 SEQID NO.11～12、JTSSR7 SEQ ID NO.13～14、JTSSR8 SEQ ID NO.15～16、JTSSR9 SEQ IDNO.17～18、JTSSR10 SEQ ID NO.19～20、JTSSR11 SEQ ID NO.21～22、JTSSR12 SEQ IDNO.23～24、JTSSR13 SEQ ID NO.25～26、JTSSR14 SEQ ID NO.27～28、JTSSR15 SEQ IDNO.29～30、JTSSR16 SEQ ID NO.31～32、JTSSR17 SEQ ID NO.33～34、JTSSR18 SEQ IDNO.35～36、JTSSR19 SEQ ID NO.37～38和JTSSR20 SEQ ID NO.39～40。

2.根據權利要求1所述的用于鑒定長江江豚個體間親緣關系的引物組合，其特征在于：所述的每對引物對中至少有一個引物的5’端進行熒光染料標記。

3.根據權利要求2所述的用于鑒定長江江豚個體間親緣關系的引物組合，其特征在于：每對引物進行標記時是采用FAM和HEX中的任意一種進行染色。

4.包含有權利要求1至3任一項所述的用于鑒定長江江豚個體間親緣關系的引物組合的試劑盒。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于：由如下組成：DNA模板，10×反應緩沖液，Mg²⁺，dNTP，上下游引物，Taq酶，滅菌雙蒸餾水。

6.權利要求4所述的試劑盒鑒定長江江豚個體間親緣關系的方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1，采集待鑒別的長江江豚血液，采用堿裂解法提取基因組DNA；

步驟2，以步驟1得到的基因組DNA為模板，進行PCR擴增；

步驟3，將步驟2得到的PCR擴增產物用ABI3730測序儀全自動核酸蛋白分析儀進行毛細管電泳檢測；

步驟4，將步驟3得到的測序峰值圖的片段大小轉化為微衛星標記，得到每個個體的基因型；

步驟5，用遺傳分析軟件進行分析，對長江江豚個體間進行半同胞、全同胞以及父母本間的親緣關系鑒定。