[發(fā)明專利]污水中殘留藥物降解菌的篩選方法及所用培養(yǎng)基

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201611242577.9
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN108611290A
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林忠華;栗艷霞;林群聲
• 申請（專利權(quán)）人: 香港城市大學(xué)深圳研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/025;C12R1/05;C12R1/38;C12R1/01
• 代理公司: 北京三友知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾;姚亮

1.一種篩選污水中可降解殘留藥物的菌株的方法，該方法包括：

將污水樣本在液體BM培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)，經(jīng)過稀釋后再在固體BM培養(yǎng)基上涂布平板培養(yǎng)，初步篩選得到污水中的菌株；

其中，所述BM培養(yǎng)基包括：

每1000mL液體培養(yǎng)基中含有0.4-0.6g NaCl、1-2g NH₄Cl、1-2g K₂HPO₄、0.25-0.75gKH₂PO₄和0.1-0.3g MgSO₄，加入超純水至1000mL；

每1000mL固體培養(yǎng)基中含有0.4-0.6g NaCl、1-2g NH₄Cl、1-2g K₂HPO₄、0.25-0.75gKH₂PO₄、0.1-0.3g MgSO₄和14-16g瓊脂，加入超純水至1000mL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，該方法還包括：

在FM培養(yǎng)基中加入兩種以上不同濃度的污水殘留藥物的混合物，接種初步篩選得到的菌種，培養(yǎng)24h以上后，利用Agilent HP1100液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測培養(yǎng)基中藥物含量，進(jìn)一步篩選除藥物降解菌。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述FM培養(yǎng)基包括：

每1000mL液體培養(yǎng)基中含有0.4-0.6g NaCl、1-2g NH₄Cl、1-2g K₂HPO₄、0.4-0.6gKH₂PO₄、0.1-0.3g MgSO₄、0.75-1.25g蛋白胨、0.25-0.75g酵母膏，加入超純水至1000mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述污水殘留藥物選自以下中的至少兩種：頭孢氨芐(Cefalexin)、氯霉素(Chloramphenicol)、萘普生(Naproxen)、新諾明(Sulfamethoxazole)、咖啡因(Caffeine)、水楊酸(Salicylic acid)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，該方法包括：

取1-2mL從城市污水處理廠采集的污水樣本，加入到15-20mL BM液體培養(yǎng)基中，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為150-200RPM，溫度為26-30℃，放置在搖床上培養(yǎng)3-5天；

將富集的培養(yǎng)液分別按照1X、3X、5X、10X的稀釋比例，再次加入到BM液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24-48h；

之后將各個梯度的培養(yǎng)液分別涂布于BM固體培養(yǎng)基上，在26-30℃的條件下倒置培養(yǎng)3-5天；

將培養(yǎng)的菌株進(jìn)一步在新的平板上分離純化，得到初步篩選的菌株，根據(jù)顏色、形態(tài)和16S rRNA基因的序列比對結(jié)果，將分離純化的菌分類。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，該方法還包括：

選取以下藥物中的至少兩種：頭孢氨芐(Cefalexin)、氯霉素(Chloramphenicol)、萘普生(Naproxen)、新諾明(Sulfamethoxazole)、咖啡因(Caffeine)、水楊酸(Salicylicacid)，混合后，按照0.1ppm和1ppm兩種濃度分別加入滅過菌的FM液體培養(yǎng)基中；

在無菌操作條件下，將初步篩選的菌株富集培養(yǎng)后分別接種于上述加入殘留藥物的滅過菌的FM培養(yǎng)基中，26-30℃，150-200RPM培養(yǎng)3-5天；

培養(yǎng)得到的混合液離心，之后用Oasis HLB純化柱和Agilent HP1100液相色譜質(zhì)譜串聯(lián)法分離和檢測藥物含量，篩選出藥物降解菌。