[發明專利]檢測鼻咽癌糖酵解相關基因分型的引物組及試劑盒

有效

• 申請號: 201611240834.5
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN107058486B
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發明（設計）人: 王暉;趙宇
• 申請（專利權）人: 王暉
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
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本發明涉及一種檢測鼻咽癌糖酵解相關基因分型的引物組。所述引物組包括GCK rs2244164正向擴增引物與反向擴增引物、HK2 rs656489正向擴增引物與反向擴增引物及HIF1?α rs10136168正向擴增引物與反向擴增引物。本發明還涉及一種檢測鼻咽癌糖酵解相關基因分型的試劑盒。所述試劑盒包括含有擴增引物，PCR Buffer，MgCl₂，dNTP及Taq酶的PCR預混液。本發明的檢測方法通過結合多重PCR技術、單堿基延伸技術和基質輔助激光解吸附電離飛行時間質譜分析技術進行基因分型檢測，具有檢測結果準確、特異性高、檢測周期短、檢測方法靈敏的優點。

技術領域

本發明涉及體外核酸檢測技術領域，尤其涉及一種檢測鼻咽癌糖酵解相關基因分型的引物組及試劑盒。

背景技術

鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma，NPC)是一種源于鼻咽上皮的高度侵襲性的惡性腫瘤。據統計，在2012年，鼻咽癌新發病例86,700人，死亡病例50,800人，因此其被認為是全球范圍內較罕見的惡性腫瘤。但在流行區域，包括中國南方和東南亞，鼻咽癌的發病率可達到15-50/100000。鼻咽的解剖部位較深，周圍臨近許多重要的血管和神經，特殊的解剖位置及局部侵襲生長的生物學行為使得手術治療難以實現；而大部分鼻咽癌的病理類型對放射線較敏感，目前鼻咽癌公認有效的治療手段為放射治療。早期的鼻咽癌患者采用單純放射治療有較為理想的效果，但由于鼻咽癌早期癥狀不明顯，大部分患者在就診時已是中晚期，腫瘤組織已向周圍侵犯，甚至發生了遠處轉移，因此單純放療治療鼻咽癌的總生存率并不理想。中晚期鼻咽癌患者由于較高的局部復發率和遠處轉移率導致總體生存率明顯降低，為提高患者總生存率，化療已經被應用于鼻咽癌的綜合治療之中。盡管目前NPC治療取得了令人欣喜的進步，但由于鼻咽癌早期癥狀不明顯及易于局部侵襲及遠處轉移的生長方式，使得很多患者就診時已處于中晚期，此類患者治療效果較早期患者差距明顯。

因此，找到有效的用于NPC臨床診治的分子標志物，對于患者早診早治，提高生存時間具有重要意義。

腫瘤細胞重編碼代謝以促進增殖生長及長期生存。這一重編碼的代謝過程的最主要特征是增加的葡萄糖攝取及發酵葡萄糖產生乳酸，即使在有足夠的氧氣及正常的線粒體功能情況下也會發生。這被稱為Warburg效應。這一效應有可能是對惡性腫瘤早期發生發展過程中間接性缺氧的適應。增強的糖酵解會損失線粒體大量產能，但內環境的改變的同時也促使腫瘤細胞更加抵抗酸中毒、提供生物合成大分子的原料、及保護細胞免于氧化應激損害。

單核苷酸多態性(Single nucleotide polymorphism,SNP)是在人群中具有一定的頻率(1％)的變異，確切的講，是基因組中由于單個堿基變異(包括插入、替換、缺失)造成DNA序列發生了改變，從而使得人類基因組更具有多樣性。許多研究已經表明，諸多基因的SNP與包括腫瘤在內的多種疾病的發生發展、預后以及治療敏感度密切相關，這提示SNP有潛力被應用到臨床進行相關疾病的預防、篩查、診斷以及指導治療，這對于個體化治療及精準治療具有非常重要的意義。

目前，已有諸多研究顯示糖酵解通路基因SNP與多種腫瘤發生發展密切相關，但糖酵解通路基因改變與鼻咽癌風險相關至今尚未被研究過。基于此，以鼻咽癌的糖酵解通路關鍵基因為切入點，對糖酵解途徑己糖激酶2(Hexokinase2，HK2)、乏氧誘導因子-1α(Hypoxia Inducible Factor-1α，HIF-1α)、葡萄糖激酶(Glucokinase,GCK),乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase,LDH)4個關鍵基因的30個標簽SNP進行檢測，這對建立新的鼻咽癌風險篩查技術有重要意義，能夠早期、靈敏和穩定的篩查鼻咽癌患病風險，以便進行及時、有效的監測評估及干預，降低醫療成本，節約社會資源。