[發明專利]檢測MYO的時間分辨熒光免疫層析試紙條、試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201611237909.4
• 申請日: 2016-12-28
• 公開（公告）號: CN108254562B
• 公開（公告）日: 2019-11-08
• 發明（設計）人: 徐部灼;宋旭東;黃若磐
• 申請（專利權）人: 廣州瑞博奧生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N21/64
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 曾鳳云;萬志香

本發明公開了一種檢測MYO的時間分辨免疫層析試紙條、試劑盒及其制備方法，所述試紙條包括底襯、以及依次設在所述底襯上的樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，所述結合墊上包被有熒光微球標記的MYO單克隆檢測抗體，所述包被膜包括平行設置、且相互間隔的檢測區和對照區，所述檢測區包被有識別單一抗原表位的MYO單克隆捕獲抗體，所述對照區包被有羊抗鼠IgG抗體；所述包被膜為結合有聚合物的硝酸纖維膜，所述聚合物為在小于450nm波長具有10％以下透光率，在500nm波長以上具有95％以上的透光率的材料。本發明的試紙條，可以快速定量檢測，試驗結果準確可靠，靈敏度高，制備方法簡單，適合大規模生產，對MYO定量檢測有積極意義。

技術領域

本發明屬于醫學檢驗技術領域，具體地說，本發明涉及一種定量檢測MYO的時間分辨熒光免疫層析試紙條、試劑盒及其制備方法。

背景技術

肌紅蛋白(Myoglobin,MYO)是一種氧結合血紅素蛋白，主要分布于心肌和骨骼肌組織，約占肌肉總量的0.1％-0.2％。潛水哺乳類如鯨、海豹和海豚的肌肉中肌紅蛋白含量十分豐富，以至于使它們的肌肉呈棕紅色。由于肌紅蛋白貯存氧使這些動物能長時間地潛在水下。在急性心肌損傷時，MYO最先被釋放入血液中，在癥狀出現約2-3小時后，血中Mb可超出正常上限，9-12小時達到峰值，24-36小時后恢復正常，即心肌梗死后1.5h即可增高，但1～2d內即恢復正常。因此，對于懷疑ACS(急性冠狀動脈綜合癥)的病人建議連續采樣測定，因為癥狀出現和蛋白標志物釋放到血液之間有一段延遲。在ACS早期診斷和監測的臨床效用已有大量文獻報告。MYO陰性有助于排除心梗。

肌紅蛋白存在于肌肉中，是由一條肽鏈和一個血紅素輔基組成的結合蛋白，心肌中含量特別豐富，是肌肉內儲存氧的蛋白質。抹香鯨肌紅蛋白三級結構于1960年由Kendrew用X線衍射法闡明，這是世界上第一個被描述的蛋白質三級結。由于三級結構與蛋白質的生物學功能直接相關，而且三級結構的分析工作難度很高，所以這項工作獲得學術界的非常高的評價。

測定血清肌紅蛋白可作為急性心肌梗死(AMI)診斷的早期最靈敏的指標。但特異性差，骨骼肌損傷、創傷、腎功能衰竭等疾病，都可導致其升高。MYO陽性雖不能確診AMI，但可用于早期排除AMI診斷的重要指標，如MYO陰性，則基本排除心肌梗死，還可用于再梗死的診斷，結合臨床，如MYO重新升高，應考慮為再梗死或者梗死延展。

肌紅蛋白的測定主要采用雙抗體夾心的免疫學方法，檢測方法則包括:

1、雙抗夾心免疫化學發光法——該法操作簡便，特異性強，敏感性高。

2、金標法——該法具有快速簡便，易觀察的特點，但是定性檢測，靈敏度不高。

3、透射免疫濁度法——該測定方法簡便、快速，可自動化，適合于批量檢測，但是免疫透射比濁的方法學及臨床應用尚需做進一步的驗證。

時間分辨免疫層析POCT最主要特點是強調出結果快速，大大縮短了實驗結果周轉時間。對于急診治療和搶救的病人，這些病人往往情況危急且病因不明，而傳統的臨床檢驗室測量時間一般要15分鐘以上，POCT一般在5分鐘以內即可完成測試，醫生根據POCT提供的信息，對病人及時作出初步診斷并擬定救治方案，必將減少住院時間，降低發病率/死亡率，產生很大的社會效益和經濟效益。同時對于一些需要長期監控的慢性病，如糖尿病的病人可以方便地按照醫生的要求由病人自己或家屬進行血糖和尿糖的監控。

目前POCT無可靠的質量保證。POCT每一個測試單元都是獨立的，因此無法保證每個測試單元質量都是一樣。其中光學法檢測的儀器會受到標本中溶血和乳糜的干擾，化學發光法會受到外源性氧化還原物質的影響。基于免疫層析，色譜和干化學技術的各種試紙條和儀器都會因溫度，濕度和pH值的不同影響基質中微蛋白的活性，進而影響結果。部分POCT儀器方法學的缺陷，靈敏性和重復性欠佳，線性范圍窄，只是急診或者急求時用于參考，必要時還需送到檢驗科進行復查。